【摘 要】
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目的 采用地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C三种物质作为诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化的基本辅剂,定向诱导犬第二代骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs),探讨BMSCs向成骨细胞分化的潜能和成骨细胞的特征性鉴定方法。方法 无菌条件下行犬髂骨穿刺,采集骨髓15～20ml,全骨髓10％FBSDMEM培养液进行原代培养。将第二代纯化的BMSCs细胞悬液(
【机 构】
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广州医学院第三附属医院骨科 中日友好医院关节外科
【出 处】
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中华医学会第10届全国显微外科学术会议
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目的 采用地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C三种物质作为诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化的基本辅剂,定向诱导犬第二代骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs),探讨BMSCs向成骨细胞分化的潜能和成骨细胞的特征性鉴定方法。方法 无菌条件下行犬髂骨穿刺,采集骨髓15～20ml,全骨髓10％FBSDMEM培养液进行原代培养。将第二代纯化的BMSCs细胞悬液(调整细胞密度为1×105/ml)接种于含地塞米松,β-磷酸甘油和维生素C的DMEM/FI2培养液的培养瓶(皿)中,体外扩增培养、传代。对细胞形态特征进行观察：行碱性磷酸酶(ALP)染色,骨桥索以及Ⅰ型胶原相关蛋白免疫荧光化学检测鉴定细胞性质。结果 原代培养的BMSCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长。诱导分化后的细胞形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长,传代后细胞体积略变大；BMSCs成骨诱导增殖后电镜下细胞呈多边形,可见碱性磷酸酶(ALP)染色阳性；经成骨细胞诱导培养14d后,细胞骨桥素以及Ⅰ型胶原相关蛋白表达阳性。结论 BMSCs易于体外分离培养及扩增,地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C体外定向诱导能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。
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