【摘 要】
：
目的：探讨靶向乙型肝炎病毒(HBV)preC/C基因的小干扰RNA(siRNA)在人类肝癌细胞系Huh-7细胞和HepG2.2.15细胞中抗病毒基因治疗效果。方法：随机设计1个非同源对照21nt的siRNA,分别克隆到pU6质粒中,构建3个shRNA表达载体pU6-C1,pU6-C2,pU6-C3和对照pU6-C4；为了检测siRNA功能建立报告基因系统,以pT-HBV1.3为模板,PCR合成目的
【机 构】
：
Center for Infectious Diseases,CPLA Kunming General Hospital,Kunming 650032,P.R.China
【出 处】
：
第二届全国病毒性肝炎慢性化重症化基础与临床研究进展学术会议
论文部分内容阅读
目的：探讨靶向乙型肝炎病毒(HBV)preC/C基因的小干扰RNA(siRNA)在人类肝癌细胞系Huh-7细胞和HepG2.2.15细胞中抗病毒基因治疗效果。方法：随机设计1个非同源对照21nt的siRNA,分别克隆到pU6质粒中,构建3个shRNA表达载体pU6-C1,pU6-C2,pU6-C3和对照pU6-C4；为了检测siRNA功能建立报告基因系统,以pT-HBV1.3为模板,PCR合成目的基因preC/C,克隆到绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pEGFP-N1)中构建携带EGFP报告基因的重组质粒pEGFP-preC/C(E-C).将构建的3个shRNA表达载体与E-C共转染Huh-7细胞,或将该3个shRNA表达载体共转染HepG2.2.15细胞.运用ELISA检测转染后24h,48h,72h和96h细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达量；免疫荧光技术检测转染后72h细胞内HBsAg和HBcAg的表达水平；实时荧光定量PCR(real-time PCR)进一步检测HBVmRNA转录产物cDNA的拷贝变化.结果：发现siRNA表达质粒与E-C共转染Huh-7细胞后48h,与pEGFP-N 1单质粒转染相比,pU6-C1,pU6-C2或pU6-C3共转染组使EGFP表达水平降低80％,而对照pU6-C4或pU6共转染组无显著降低EGFP的表达,差异有统计学意义(P＜0.01)；免发现pU6-C1结果与显微镜观察/流式细胞仪细胞计数、ELISA和免疫荧光技术检测结果相吻合.抗病毒效果48h后作用明显,72h达到高峰.结论：发现靶向preC/C基因的RNAi能够有效特异抗HBV在人类肝癌细胞系中复制与表达.RNAi可能成为抗重大传染病HBV/HCV/HIV有效的基因治疗技术.
其他文献
目的：通过检测各组大鼠子宫内膜与出血、疼痛等副作用的相关因子,以初步探讨新材料络合铜生物高分子复合材料宫内节育(CuCl2/SiO2/PVA IUD)对大鼠子宫内膜内环境的影响和减少置器后副反应的可能机制。方法：40只性成熟SPF级雌性SD大鼠10-12周龄,随机分为4组：金属裸铜组、低剂量络合铜组(0.5-1.0 μg/d)、高剂量络合铜组(1.1-2.0μg/d)和空白对照组.置器60天后,对
目的：应用基因芯片技术检测子痫前期及胎儿生长受限患者和正常妊娠胎盘组织差异表达基因，探索两种疾病的病因。方法：用RMA的方法对芯片原始数据nomalization.采用斯坦福大学的SAM(Signific：ance Analysisof Microarrays)检验进行显著性检验.然后对显著性差异的基因做gene list enrichment analysis.结果：子痫前期组与正常孕妇组比较经
本文测定正常孕妇、子痫前期(PE)患者、妊娠期糖尿病(GDM)患者及PE合并GDM患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平，探讨NGAL与PE、GDM和PE合并GDM糖脂代谢及疾病严重程度的相关性。
为了研究早发型重度子痫前期的发病孕周与妊娠结局的关系；进一步探讨早发型重度子痫前期的患者终止妊娠的时机和方式。本文回顾性分析我院产科收治的早发型重度子痫前期患者，根据其发病孕周分为4组，即A组(≤28周)、B组(孕28+1-30周)、C组(孕30+1-32周)、D组(孕32+1-34周)。分析不同孕周发病患者住院期间治疗时间、并发症情况、围产结局、随访产妇及新生儿预后的差异。结果表明，-34孕周发
目的：探讨Rho (RhoA、 RhoB、RhoC)在大鼠不同孕期胎盘中的表达情况及其在大鼠胎盘形成发育成熟过程的中作用。方法：将成年雌雄wistar大鼠各20只按1∶1合笼,发现阴栓即为妊娠0日,分别于大鼠孕7、10、13、15、18天时剖宫取胎盘(每组4只),称取胎盘重量,提取不同孕期胎盘中的蛋白,采用western-blot法检测Rho(RhoA、RhoP、RhoC)的表达水平.结果：发现5
HLA-G对β-hCG表达的调控不依赖cAMP通路，HLA-G通过MEK1/2通路促进绒毛膜癌来源的滋养细胞表达β-hCG，并促进滋养层细胞的融合。结果显示，HLA-G通过对hCG的调控参与胚胎着床和胎盘的形成。
本文采用慢病毒感染，建立稳定表达HLA-G CDS区的人绒毛外滋养细胞HTR8/SVeno细胞系和人绒毛膜癌细胞BeWo细胞系。小干扰RNA降调节JEG-3细胞HLA-G的表达。通过Transwellcell migration assay，检测HLA-G对滋养细胞迁移能力的影响。结果HLA-G通过改造细胞骨架和粘着斑促进滋养细胞的迁移。这一结果显示，HLA-G可能参与胎盘的形成。
目的：探讨重度子痫前期并发低蛋白血症对妊娠结局的影响。方法：回顾性分析在福建医科大学附属第一医院收治的147例重度子痫前期患者临床资料，以血浆白蛋白30g/L为界将病例组分为非低蛋白血症组47例和低蛋白血症组100例，比较两组间孕妇并发症、新生儿窒息、低出生体重儿及围生儿死亡率等方面的差异.结果：1、低蛋白血症组孕妇人院血压、并发症的例数显著高于非低蛋白血症组(P＜0.05)，发病孕周及终止妊娠孕
目的：分析慢性乙型肝炎患者(CHB)乙肝病毒相关抗原在肝细胞内表达情况与肝脏炎症、纤维化的关系，进一步探讨乙肝病毒诱发肝脏炎症、纤维化关系的机理。方法：回顾性分析2008年行肝活检确诊的慢性乙型肝炎患者，分析肝组织HBsAg、HBcAg、PreS1表达情况与血清HBV DNA水平的关系、以及与肝组织炎症分级(G)、纤维化分期(S)的关系。结果：CHB患者PreS1≥2组血清HBV DNA滴度明显高
目的：观察和分析慢性丙型肝炎患者经干扰素联合利巴韦林治疗获得治疗结束应答后长期随访中的复发情况及其影响因素。方法：长期随访资料完整的146例慢性丙型肝炎患者纳入回顾性统计分析.治疗方案为聚乙二醇干扰素(126例)或普通干扰素(20例)联合利巴韦林治疗,疗程依基因型分别为24周(非1b型)或48周(1b型).结果：146例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗结束后平均随访33.45±16.41月,最短12个月