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背景：内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是导致糖尿病和胰岛素抵抗发生的重要途径,并与胰岛素抵抗和胰岛细胞功能减退均密切相关.而内质网应激启动的凋亡途径是近年才发现的一种新的凋亡途径,也是导致胰岛素抵抗的枢纽性机制.对内质网应激的干预,也成为治疗糖尿病的一个新的策略。ERp29是新近发现的定位于真核细胞内质网(endoplasmic reticulum,ER)的可溶性蛋白,广泛表达于多种组织,在各种哺乳动物呈高度保守,有高度同源性,但其功能尚不清楚。
目的：在验证新内质网蛋白29(ERp29)亚细胞定位的基础上,进一步探讨在体外建立的胰岛13细胞内质网应激模型中,ERp29的表达情况,并对ERp29在胰岛细胞内质网应激引致的胰岛细胞损伤过程中作用机制初步探索。
方法：以体外培养的胰岛β细胞为研究对象,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的Ins-1胰岛细胞株,通过检测衣霉素诱导后Bip/GRp78的表达情况,来确定体外培养胰岛细胞是否处于内质网应激状态,建立内质网应激模型；采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹等方法检测发生了内质网应激的胰岛细胞中ERp29的mRNA以及蛋白的表达。
结果：分别利用ERp 29抗体和抗内质网标志蛋白CNX抗体免疫标记爬片NIH3t3细胞,Alex Fluor 488/594染色后,激光共聚焦显微镜下观察显示ERp29与CNX有共同的细胞定位,表明ERp29定位于内质网；内质网应激模型建立结果表明,即随着衣霉素的剂量增加,Ins-1细胞出现内质网应激,其表现为内质网应激标志蛋白Bip/GRp78的表达水平逐次升高(差异均具有统计学意义,P<0.01),Erp29和Bip/GRp78在蛋白水平的改变与其mRNA水平较为一致,其也表现出相应的增加(与对照组比较,除2ug/ml组外,其余各组均具有统计学差异P<0.05或P<0.01)。
结论：Erp29在体外培养的胰岛细胞内质网应激模型中表达增高,Erp29不仅在内质网应激介导的胰岛细胞损伤起重要作用的一个蛋白,并且在其他内质网应激介导的其他组织细胞损伤中也起着重要作用,与细胞损伤密切相关。
目的：在验证新内质网蛋白29(ERp29)亚细胞定位的基础上,进一步探讨在体外建立的胰岛13细胞内质网应激模型中,ERp29的表达情况,并对ERp29在胰岛细胞内质网应激引致的胰岛细胞损伤过程中作用机制初步探索。
方法：以体外培养的胰岛β细胞为研究对象,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的Ins-1胰岛细胞株,通过检测衣霉素诱导后Bip/GRp78的表达情况,来确定体外培养胰岛细胞是否处于内质网应激状态,建立内质网应激模型；采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹等方法检测发生了内质网应激的胰岛细胞中ERp29的mRNA以及蛋白的表达。
结果：分别利用ERp 29抗体和抗内质网标志蛋白CNX抗体免疫标记爬片NIH3t3细胞,Alex Fluor 488/594染色后,激光共聚焦显微镜下观察显示ERp29与CNX有共同的细胞定位,表明ERp29定位于内质网；内质网应激模型建立结果表明,即随着衣霉素的剂量增加,Ins-1细胞出现内质网应激,其表现为内质网应激标志蛋白Bip/GRp78的表达水平逐次升高(差异均具有统计学意义,P<0.01),Erp29和Bip/GRp78在蛋白水平的改变与其mRNA水平较为一致,其也表现出相应的增加(与对照组比较,除2ug/ml组外,其余各组均具有统计学差异P<0.05或P<0.01)。
结论：Erp29在体外培养的胰岛细胞内质网应激模型中表达增高,Erp29不仅在内质网应激介导的胰岛细胞损伤起重要作用的一个蛋白,并且在其他内质网应激介导的其他组织细胞损伤中也起着重要作用,与细胞损伤密切相关。