【摘 要】
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构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达载体并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况,同时探讨其是否可以诱导NIH3T3细胞发生恶性转化。本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;农业部
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达载体并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况,同时探讨其是否可以诱导NIH3T3细胞发生恶性转化。本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env.exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有YXXM基序。系统进化树表明克隆的exJSRV-env基因属于具有致病性的外源性毒株的囊膜基因。成功地运用生物信息学软件推导出该蛋白的基本性质,并预测出高级结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。这说明绵羊肺腺瘤内蒙株的囊膜蛋白可以引起NIH3T3细胞发生恶性转化。本研究为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。
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