【摘 要】
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链孢粘帚霉(Clonostachys rosea f.catenulate=Gliocladium catenulatum)是一类分布广泛的土壤习居菌,可以寄生核盘菌、丝核菌、镰刀菌、灰葡萄孢等多种植物病原真菌,具
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所/农业部作物有害生物综合防治重点实验室,北京 100081
【出 处】
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中国植物保护学会2014年学术年会
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链孢粘帚霉(Clonostachys rosea f.catenulate=Gliocladium catenulatum)是一类分布广泛的土壤习居菌,可以寄生核盘菌、丝核菌、镰刀菌、灰葡萄孢等多种植物病原真菌,具有良好的生防应用潜力.本研究从实验室前期构建的高效链孢粘帚霉菌株HL-1 -1寄生核盘菌菌核差异表达cDNA文库中获得一个高表达丰度的脂滴包被蛋白基因Per3.采用SYBR Green I法进行实时荧光PCR定量监测,结果表明,该基因在菌核粉诱导初期表达量有一定程度下降,但随后迅速上升,96h时表达量达到峰值,为诱导前的6.6倍.采用5RACE和3RACE获得了Per3 cDNA全长,并通过PCR获得了Per3 DNA全长,结果表明该基因由1 284个碱基组成,在377 - 429位点处有一段53bp的内含子.生物信息学分析表明Per3含有一个555bp的开放阅读框,可以编码一个由184个氨基酸组成的多肽,Per3没有明显的信号肽,不存在疏水区和跨膜区.为研究Per3基因在链孢粘帚霉寄生菌核过程中的作用,将gpdA-Per3-trpC连接到pAN7-1载体上,构建过表达载体,采用PEG-CaCl2转化方法将过表达载体转入链孢粘帚霉HL-1-1原生质体中,通过潮霉素抗性标记进行筛选,连续转接三代筛选稳定表达的阳性克隆.对获得的102个稳定遗传的Per3转化子进行生物学测定,结果显示,PDA平板培养7天后转化子的菌落直径范围在5.84 -7.06cm,PD培养液中培养3天产孢水平在1.71×107～5.69×108孢子/ml,差异显著.对转化子寄生性测定表明,102个转化子中有2个,1-2和2-1,表现出极强的菌核寄生能力,共培养12h寄生率达到100％,比野生菌株高63.3％.采用SYBR Green Ⅰ法对这2株转化子中Per3基因表达水平进行定量监测,1-2、2-1突变株Per3表达量与野生菌株相比分别增加1.7倍和1.4倍,表明Per3基因在链孢粘帚霉HL-1-1寄生核盘菌的过程中发挥着一定作用,脂滴包被蛋白基因与菌寄生作用相关.研究结果丰富了菌寄生相关基因的种类,同时,也为研究链孢粘帚霉和核盘菌的互作提供了新的视野.
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