【摘 要】
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蜱组胺结合蛋白(histamine binding protein,HBP)是由蜱的唾液腺分泌的具有特异性结合组胺的一类功能性蛋白的总称,在止痒和免疫抑制上具有重要作用。本实验室从亚洲璃眼
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点实验室,上海 200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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蜱组胺结合蛋白(histamine binding protein,HBP)是由蜱的唾液腺分泌的具有特异性结合组胺的一类功能性蛋白的总称,在止痒和免疫抑制上具有重要作用。本实验室从亚洲璃眼蜱的唾液腺内鉴定出一个ORF大小为684bp的组胺结合蛋白,命名为亚洲璃眼蜱组胺结合蛋白(HaHBP),根据其药物开发应用潜力,申请并获得了中国发明专利授权。本研究根据渗透肽TAT具有跨膜转导的作用,为了增强HaHBP在生物被膜传递和吸收效率,开发新型抗组胺药物,我们进行了TAT与HaHBP融合表达,并测试其结合组胺的活性,为蜱的组胺结合蛋白的药物开发应用提供基础。将HaHBP开放阅读框基因片段与编码TAT渗透肽基因片段,通过酶切位点EcoR连接后克隆至真核表达载体pFastBacHTa,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,构建重组杆粒rBac-HaHBP-TAT,转染至sf9昆虫细胞,进行融合蛋白的表达。重组蛋白经SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光鉴定,结果表明,融合蛋白HaHBP-TAT在Bac-To-Bac杆状病毒系统中稳定表达,融合蛋白大小与预期一致。真核表达融合蛋白纯化后进行组胺结合试验,结果表明,TAT融合表达的组胺结合蛋白(HaHBP)具有与组胺结合的能力。本研究为研制新型蜱源抗组胺药物提供了实验依据。
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