【摘 要】
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目的:研究临床分离大肠埃希菌中衰减子基因突变对AmpC基因表达以及耐药表型的影响.方法:用三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测.聚合酶链反应(PCR)
【机 构】
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中国人民解放军总医院呼吸科微生科,北京,100853
【出 处】
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中华医学会首届全国内科感染及合理应用抗生素专题研讨会
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目的:研究临床分离大肠埃希菌中衰减子基因突变对AmpC基因表达以及耐药表型的影响.方法:用三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测.聚合酶链反应(PCR)、基因测序以及比对等方法对调节基因进行扩增,分析.并把调节基因克隆到pCAT3-basic(无启动子的报告基因载体)上,用酶联免疫法(直接法)和最小抑菌浓度测定(间接法)等方法对基因表达进行研究.结果:和标准菌株大肠埃希菌K-12ampC基因相比,受试菌的衰减子区出现了4个碱基22C-T,26、27TA-GT、32G-A的替换.该株菌三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明该菌株能产三种等电点(PI)分别为5.4、8.2及9.0的β-内酰胺酶,等电点为9.0的β-内酰胺酶能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制.微量稀释法检测表明该菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感.把它的AmpC调节基因成功地克隆到报告基因载体pCAT3-basic中,直接和间接检测表明突变的调节基因能够比敏感菌株调节基因表达CAT蛋白的水平高约10倍左右.结论:大肠埃希菌衰减子突变能够导致AmpC基因高表达而对多种β-内酰胺类抗生素表现耐药.此类菌株的出现,将为临床抗感染治疗带来新的困难.
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