【摘 要】
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赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)是多种海水鱼类的重要病原.本文针对赤点石斑鱼神经坏死病毒,设计了特异性引物,并对反应体系中Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度进行了优化.优化后的反应体系为：5mmol/L MgCI2、1.2mol/L Betaine、1.2mmol/L dNTPs、1.6mmol/L引物l
【机 构】
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农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛266071;上海海洋大学水产与生命学院 上海201306
【出 处】
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第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛
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赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)是多种海水鱼类的重要病原.本文针对赤点石斑鱼神经坏死病毒,设计了特异性引物,并对反应体系中Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度进行了优化.优化后的反应体系为：5mmol/L MgCI2、1.2mol/L Betaine、1.2mmol/L dNTPs、1.6mmol/L引物la、0.8mmol/L引物2a/3a、0.2mmol/L引物4s/5a、10×ThermoPol Buffer 2.5μl、BstDNA聚合酶8U、MLV反转录酶14U以及适量的RNA模板,DEPC水补足至25μl.反应体系在69℃下扩增60min.实验结果表明：该方法的检测灵敏度为101拷贝,反应特异性良好,与病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)、淋巴囊肿病毒(LCDV)、哈维氏弧菌、鳗弧菌等多种鱼类病原均无交叉反应.使用该方法对实际样品进行检测,与OIE的RT-PCR标准方法相比较,该方法操作更简单,所需时间更短,有更好的实用性.本实验所建立的赤点石斑鱼神经坏死病毒交叉引物等温扩增核酸试纸条方法(RT-CPA)检测方法简单、快速、灵敏度高且特异性强,可以广泛用于疾病的现场快速诊断.
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