【摘 要】
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由青枯菌引起的青枯病是世界范围内严重危害马铃薯产业的细菌性病害,青枯菌能够通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白来促进侵染。因此,鉴定效应蛋白的分泌是研究其功能的重要基
【机 构】
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华中农业大学园艺林学学院/马铃薯生物学与生物技术农业部重点实验室/园艺植物生物学教育部重点实验室/国家蔬菜改良中心华中分中心,湖北武汉430070
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由青枯菌引起的青枯病是世界范围内严重危害马铃薯产业的细菌性病害,青枯菌能够通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白来促进侵染。因此,鉴定效应蛋白的分泌是研究其功能的重要基础。研究建立了基于腺苷酸环化酶(CyaA)报告基因的鉴定体系,克隆了Ⅲ型分泌系统效应蛋白的启动子区域及其分泌信号区域,融合表达带有CyaA 报告基因及FLAG标签的重组质粒。克隆了3个不同效应蛋白的启动子区域,比较了3个启动子在转录水平上的表达差异,并鉴定了其在蛋白水平的表达丰度,并利用高效表达的启动子进行了分泌性鉴定。结果显示,rip6效应蛋白的启动子启动效率较高且蛋白表达丰度高。进一步利用rip6效应蛋白启动子进行分泌鉴定,结果显示野生型转化质粒的马铃薯接种块茎中的cAMP显著高于Ⅲ型分泌系统突变体菌株接种的马铃薯块茎的cAMP含量,证明该系统可以有效检测效应蛋白的分泌。研究为马铃薯青枯菌效应蛋白分泌建立了高效稳定的体系,为深入研究效应蛋白毒力功能奠定基础。
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