【摘 要】
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目的：本研究拟构建检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)病原的二重液相芯片(Diplex xMAP Array)检测方法，为常见猪病的快速高通量鉴别诊断搭建新技术平台。方法：根据GenBank中公布的PPV结构蛋白VP2的基因及PCV2全基因序列，用DNAman V6进行多序列比对分析，筛选出保守区后用Beacon Designer’7.9设计出PPV和PCV2的特异性探针、5I物及
【机 构】
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中国兽医药品监察所，北京 100081 中国检验检疫科学研究院，北京 100029
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目的：本研究拟构建检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)病原的二重液相芯片(Diplex xMAP Array)检测方法，为常见猪病的快速高通量鉴别诊断搭建新技术平台。方法：根据GenBank中公布的PPV结构蛋白VP2的基因及PCV2全基因序列，用DNAman V6进行多序列比对分析，筛选出保守区后用Beacon Designer’7.9设计出PPV和PCV2的特异性探针、5I物及探针互补序列，探针与微球偶联，下游弓I物和探针互补序列标记生物素；采用不对称性二重PCR扩增靶序列，PCR特异性和敏感性产物与偶联验证成功的探针杂交，杂交结果用液相芯片仪检测；应用建立的芯片方法检测20份临床样品，并与PCR检测结果做比较。结果：通过条件优化，建立了PPV和PCV2的二重液相芯片检测方法，引物和探针与其他病毒没有交叉，特异性好，对PPV和PCV2基因拷贝数检测下限分别为7.66×103个、1.29 × 102个；用该方法与普通PCR方法对临床20份样品的检测，结果100％一致。结论：本研究建立了PPV和PCV2的二重液相芯片检测方法，且该方法敏感特异，临床检测良好，适于推广应用。
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以真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物，通过对各个反应条件的摸索和优化，成功研制了检测猪瘟病毒抗体的猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒。试验证明，该试剂盒的敏感性为94.6％，特异性为95.3％，与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62％。同时对免疫猪血清的检测结果表明，该试剂盒可以用于免疫动物抗体的动态监测。
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基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫方法的目的，以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标，设计特异性PCR引物和TaqMan探针，构建重组质粒制备标准品，进行荧光定量PCR扩增，通过优化PCR反应体系，测定线性范围，评价方法的特异性、灵敏度和重复性，成功构建、研制了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法和诊断试剂。该方法的检测线性范围为1×108-1×10
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