【摘 要】
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以洛岛白母鸡为试验鸡群，根据210288天产蛋记录，结合产蛋率(＞80％)、破蛋率分为正常组与实验组。结合家系记录，选择试验群体内鸡蛋破损率＞20％的8只个体作为实验组，破损率为＜1％的8只个体作为对照组，组成两尾群体。采取翅静脉采集血液(ACD抗凝)用于提取基因组DNA。采集产蛋后18h的子宫组织(液氮保存)用于提取组织总RNA。根据启动子(转录起始位点上游1.5-2 KB)的序列，每个基因设计
【机 构】
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中国农业大学动物科技学院,北京 100193
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以洛岛白母鸡为试验鸡群，根据210288天产蛋记录，结合产蛋率(＞80％)、破蛋率分为正常组与实验组。结合家系记录，选择试验群体内鸡蛋破损率＞20％的8只个体作为实验组，破损率为＜1％的8只个体作为对照组，组成两尾群体。采取翅静脉采集血液(ACD抗凝)用于提取基因组DNA。采集产蛋后18h的子宫组织(液氮保存)用于提取组织总RNA。根据启动子(转录起始位点上游1.5-2 KB)的序列，每个基因设计3-4对引物，采用直接PCR测序法对16个个体的两个基因启动子分别进行Sanger测序。利用Mega5.1软件来分析基因启动子区域多态性。采用双标准曲线法分析基因mRNA表达差异。使用SAS 9.1软件分析基因启动子区域多态性与蛋壳品质、基因mRNA表达量的关系。通过分析发现，本试验选取的两尾群体母鸡所产蛋的蛋壳强度和蛋壳厚度差异极显著。通过定量PCR试验发现正常组中LOC100859070和LOC421441两个基因的mRNA表达量都显著低于破蛋组 ,说明这两个性状可能与LOC100859070和LOC421441基因的表达有关。通过对这两个基因启动子区1-2Kb多态位点分析发现，在两尾群体中并没有影响mRNA表达量差异的共有变异，说明研究的启动子区变异不是导致这两个基因表达差异的直接原因。直接PCR测序法结果发现，LOC100859070基因在破蛋组第三个个体中的突变位点较多，但不是特定的某一种类型的突变。根据在线网站SofrBerry对LOC421441基因和LOC100859070基因的启动子区进行预测，只在LOC421441基因启动子区的一1470位置预测出TATA增强子元件。
其他文献
以安徽省4个地方家禽品种(群体)皖南三黄鸡60个，五华鸡120个，淮北麻鸡60个，淮南麻黄鸡308个，共计548个个体为样品。采集血样使用酚氯法抽提总DNA。根据Uemoto等(2009)的研究合成引物对OCX-32基因第4外显子进行PCR扩增，扩增产物使用限制性内切酶NcoI进行分析。利用软件POPGEN(Version1.31)计算OCX-32基因第4外显子在4个群体中的遗传多样性，利用一般线
试验所用金定鸭来自国家水禽种质资源基因库(泰州)。根据GenBank上公布的鸭RIG-I序列设计引物，利用RT-PCR克隆鸭RIG-I基因CDS区，根据保守结构域预测结果，构建携带6*his组氨酸标签的不同结构域缺失突变体的真核表载体(RIG-I-Full,RIG-I-N和RIG-I-C)，转染鸡胚成纤维细胞DF1，经RT-PCR、间接免疫荧光方法鉴定重组质粒在细胞中转录与表达;同时利用RT-qP
选取不同饲料转化率、遗传背景相同且发育正常的120日龄崇仁麻鸡肠样品，进行总RNA的提取，反转录合成cDNA。采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物，实时荧光RT-PCR，每个样品2个重复，根据Ct值以及相应标准品的浓度制作标准曲线。用SPASS 17.0统计软件分析数据，采用t检验和单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差异显著性检验，计算出样品中基因PepTlmR
选取同批出雏金定鸭(无母源抗体)，由国家级水禽种质资源基因库(泰州)提供，3日龄时选取体重相当，精神状态较好的80只雏鸭，即试验组(40只)、对照组(40只)。试验组注射0.4mL(0.5mg/mL)PolyI:C，对照组注射0.4mL生理盐水，隔离饲养，分别于0，4,8,12,24,36,48,72,96h分不同时间点采集胸腺、肝脏、脾脏、肺、肾脏等组织样(其中对照组脾脏取两份样品，一份用于基因
本次实验采用如皋鸡品种，分别在2,4,6,8,10,12周龄，屠宰6只雌性如皋母鸡采集腿肌样品。用HPLC方法分析肌苷酸含量。根据标准曲线测定样品IMP含量，结果使用SPSS16.0统计分析。部分腿肌样品进行RNA抽提和芯片杂交试验。芯片数据采用Gene Spring Software 11.5.1进行归一化处理，标准化后的数据筛选FC≥2的差异表达基因。基于KEGG数据库整合分析IMP代谢网络，
以白番鸭为父本，M18、大型、中型和小型4个母本种鸭为母本，每个亲本及其杂交后代半番鸭各100120只，共9001 180只。饲养至70日龄，每组选取平均体重6只供屠宰实验，每组随机采血40只。选用了8个微卫星引物作为实验位点。用8％变性聚丙烯酞胺凝胶电泳检测，电泳结束后银染显色、分型。根据遗传距离公式计算出各亲本间的奈氏遗传距离(DA)，其中番鸭♂×M18♀的遗传距离最大，其次为番鸭♂×中型♀、
选取饲养条件环境条件一致的海兰褐蛋鸡50只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管和脑组织，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。反转录反应按照试剂盒说明书进行合成cDNA。根据NCBI GenBank中已发表的鸡Slic2基因组序列，用Primer 5.0引物设计软件设计所
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选取饲养环境条件一致的海兰褐蛋鸡10只，在240日龄时分别采集心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、脑组织和胸腺，迅速收集并置于液氮中冷冻，-80℃保存样品待用。所采组织样用Trizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶电泳检测，并测定浓度，-80℃保存以备反转录。按照试剂盒说明书提供步骤进行RNA反转录，合成DNA。根据NCBIGenBank中已收录的鸡LIF基因DNA序列(NCBI Reference
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