宫颈鳞癌组织中CD44+和CD44-细胞差异达分子鉴定及机制研究

来源 :2015中国医师协会妇产科医师大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Blue0220
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  目的:筛查宫颈癌组织中CD44+和CD44-细胞的差异表达分子,并进一步探讨其作用和可能机制.方法:利用超高速细胞分选平台纯化CD44+和CD44-宫颈鳞癌细胞、采用LTQ-Orbitrap质谱技术对其进行差异蛋白质表达谱的鉴定,运用q-PCR和western-blot技术对Fra-1等差异分子进行验证,最后,探讨CD44影响Fra-1的可能作用机制.结果:CD44在宫颈癌组织中阳性表达率为6.74±1.24%、而在宫颈癌旁组织中阳性表达率仅为1.29±0.72%,CD44在宫颈鳞癌组织中表达明显较高(P<0.05);qPCR结果显示Fra-1、P63以及SOX2等基因在CD44+的宫颈鳞癌细胞中表达高于CD44-的宫颈鳞癌细胞,但TP53和LTF、等基因在CD44+的宫颈鳞癌细胞中表达低于CD44-的宫颈癌细胞.我们采用LTQ-Orbitrap质谱技术对CDD44+和CD44-的宫颈鳞癌细胞的蛋白质表达谱进行分析,结果发现有191个蛋白质分子在CD44+宫颈鳞癌细胞中特异性表达、222个在CD44-宫颈鳞癌细胞中特异性表达、而在CD44+和CD44-宫颈鳞癌细胞中均表达的蛋白质分子有249个.191个在CD44+宫颈鳞癌细胞中特异性表达蛋白质分子中,包含有Fra-1、ZNFX1以及HNRNPL等蛋白质分子,其中Fra-1的score为95.75、Unique Peptides为15,提示CD44+宫颈癌细胞中Fra-1的表达水平发生明显改变.流式细胞术和western-blot技术证实Fra-1基因在CD44+宫颈鳞癌细胞中表达高于CD44-宫颈鳞癌细胞.Fra-1为miR-19a和miR-19b调控靶基因,我们研究还证实miR-19a和miR-19b在CD44+细胞中表达降低.我们研究还发现:与CD44-宫颈鳞癌细胞相比较,PI3K和phospho-ERK 1/2在CD44+宫颈鳞癌细胞中表达水平较高,提示CD44可能通过PI3K/MEK信号通路来影响Fra-1的表达,但其具体机制有待于进一步实验证实.结论:Fra-1等分子在CD44+宫颈癌细胞中高表达,提示CD44与Fra-1存在相互关系、CD44可能通过PI3K/MEK信号通路来影响Fra-1的表达.
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