论文部分内容阅读
目的:探讨B细胞特异的莫洛尼病毒插入位点1(Bmi1)基因在内皮细胞促进胶质瘤细胞干性表型中的可能作用.方法:实验以小鼠胶质瘤细胞系GL261和小鼠脑内皮细胞系b.END3为研究材料,采用Transwell双室细胞共培养、极限稀释法成球实验、实时定量PCR、Western印迹、流式细胞术、体内移植瘤实验以及siRNA基因干扰等方法,检测内皮细胞对胶质瘤细胞体外成球能力和体内成瘤能力、CD133阳性细胞比例、Bmi1基因表达的影响以及抑制Bmi1基因表达对上述现象的影响.结果:与胶质瘤细胞单独培养的对照组相比:(1)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后其体外成球能力明显增强,形成干细胞球数目明显增多(40个细胞/孔的浓度时为62.5％±1.5％比25.0％±4.6％,P=0.000),体积明显增大;内皮细胞与胶质瘤细胞共同移植后所形成的移植瘤出现早、体积更大[(0.798±0.297)比(0.362±0.123)cm3,P=0.000).(2)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后其CD133阳性细胞群比例增大(8.48％±0.78％比4.81％±0.37％,P=0.000).(3)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后Bmi1基因的mRNA(2.72±0.18比1.00±0.15,P=0.000)和蛋白表达明显增加.(4)利用siRNA干扰胶质瘤细胞Bmi1基因表达后,内皮细胞促进胶质瘤细胞干性表型的上述作用明显减弱,敲低Bmi1基因的GL261细胞共培养的CD133阳性比例显著低于共培养的普通GL261细胞(0.34％±0.21％比1.70％±0.69％,P=0.025).结论:内皮细胞可能通过上调胶质瘤细胞Bmi1基因表达促进胶质瘤细胞的干性表型.