【摘 要】
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Mx蛋白是在IFN诱导下产生的抗病毒蛋白质,在各物种中表现遗传多样性.目前对于Mx的研究主要集中于哺乳动物的Mx基因.迄今为止对禽类的Mx蛋白抗病毒能力及机制的研究非常有限,仅有研究显示鸡Mx蛋白可以抗流感病毒,水泡性口炎病毒以及新城疫病毒.本实验对鹅Mx的免疫学特性和抗病毒机制进行了研究.首先,我们对健康和坦布苏病毒(TMUV)感染的2周龄鹅的Mx进行组织差异表达分析,发现病毒感染可诱导免疫组织
【机 构】
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四川农业大学动物医学院预防兽医研究所,成都四川 四川农业大学动物医学院预防兽医研究所,成都四川;四
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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Mx蛋白是在IFN诱导下产生的抗病毒蛋白质,在各物种中表现遗传多样性.目前对于Mx的研究主要集中于哺乳动物的Mx基因.迄今为止对禽类的Mx蛋白抗病毒能力及机制的研究非常有限,仅有研究显示鸡Mx蛋白可以抗流感病毒,水泡性口炎病毒以及新城疫病毒.本实验对鹅Mx的免疫学特性和抗病毒机制进行了研究.首先,我们对健康和坦布苏病毒(TMUV)感染的2周龄鹅的Mx进行组织差异表达分析,发现病毒感染可诱导免疫组织中Mx转录水平显著上调.在鹅胚成纤维细胞(GEF)中过表达鹅Mx蛋白可显著降低TMUV病毒的增殖.为了进一步探索Mx蛋白抗病毒分子机制,我们构建了pCDNA3.1-Mx-K125A,pCDNA3.1-Mx-T145A,pCDNA3.1-Mx-▲ L4,pCDNA3.1-Mx-K125A + ▲ LA以及 pCDNA3.1-Mx-T145A + ▲LA的突变Mx蛋白的真核表达质粒,并在GEF检测突变蛋白的抗TMUV活性.研究发现AA 125K GTP绑定位点以及L4区对Mx抗TMUV病毒至关重要,而AA 145T GTP绑定位点并不直接决定Mx抗病毒活性.另外,为了探索Mx的亚细胞定位和抗TMUV之间的关联性,我们开展如下实验：首先对GEF、HEK293T以及BHK21三种细胞系上转染Pegfp-C1-linker-Mx,发现鹅Mx蛋白同时定位于细胞核和细胞质,并呈小点状和颗粒状分布的特征；进一步,经生物信息血分析,我们初步确定Mx具备一段非经典型双核定位信号序列,基于此我们构建Pegfp-C1-goMx-NLS质粒并转染细胞,确认该序列具有弱核定位作用；最后,我们对GEF上对瞬时过表达Pegfp-C1- linker-Mx蛋白与TMUV进行共定位,发现该TMUV与Mx存在物理位置上的重叠,且Pegfp-C1-linker-Mx在24h,48h,72h均表现强抗TMUV病毒活性.综上,水禽Mx蛋白与TMUV存在相互作用,证实Mx的抗禽黄病毒的功能.
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