【摘 要】
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目的 探讨DJ-1 L166P突变基因在帕金森病发生中的作用.方法 利用TRLzol试剂一步法提取SH-SY5Y细胞的总IRNA,采用RT-PCR试剂盒反转录获得细胞的cDNA,特异引物扩增DJ-1片段
【机 构】
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110001沈阳,中国医科大学实验动物部
【出 处】
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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)
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目的 探讨DJ-1 L166P突变基因在帕金森病发生中的作用.方法 利用TRLzol试剂一步法提取SH-SY5Y细胞的总IRNA,采用RT-PCR试剂盒反转录获得细胞的cDNA,特异引物扩增DJ-1片段,将氨基酸编码166位亮氨酸突变为脯氨酸,构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射的方法 将DJ-1 L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1受精卵雄原核中并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、southern检测,对southern鉴定阳性的转基因小鼠进行RT-PCR、western表达检测.
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