【摘 要】
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目的：探讨在哺乳动物细胞中表达的截短形式的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV—2)包膜糖蛋白D(gD)作为单纯疱疹病毒亚单位疫苗候选疫苗的可行性。方法：Anthewin软件分析单纯疱疹病毒
【机 构】
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南京军区军事医学研究所医药生物技术研究所,苏省医药生物技术重点实验室南京,210002
【出 处】
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第六届长三角科技论坛生物产业发展分论坛
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目的：探讨在哺乳动物细胞中表达的截短形式的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV—2)包膜糖蛋白D(gD)作为单纯疱疹病毒亚单位疫苗候选疫苗的可行性。方法：Anthewin软件分析单纯疱疹病毒Ⅱ型包膜糖蛋白D(gD2)胞外区氨基酸序列,筛选抗原表位富集区,选用真核细胞及原核细胞均偏爱的密码子,化学合成全新的基因片段。将化学合成的基因gD2克隆到真核表达载体pCEP4中,构建重组质粒pCEP4—gD2,用脂质体转染法转染至CHO细胞中进行筛选、表达。表达的细胞上清上镍柱,用亲和层析的方法纯化表达的蛋白。96孔板包被纯化的gD2蛋白,羊抗HSV1+HSV2多抗检测蛋白抗原性。用纯化的重组蛋白联合福氏佐剂免疫6—8周龄雄性昆明小鼠,常规方法制备血清,间接ELISA检测小鼠体液免疫应答水平。结果：成功构建出真核重组质粒pCEP4—gD2,经测序基因序列完全正确。重组质粒转染至CHO细胞经选择性抗生素筛选后收集细胞上清进行SDS—PAGE电泳检测及WesternBlot检测,gD2蛋白样品在相对分子量46kD处出现特异性蛋白带,分子量符合预期大小,而空质粒载体转染组均没有此相应的蛋白质条带。ELISA检测蛋白抗原性,其OD值与蛋白浓度有良好线性关系,表明蛋白具有较好的抗原性。制备的小鼠抗血清用间接ELISA测抗体效价,结果显示制备的重组蛋白有较好的免疫原性。讨论：利用真核表达系统得到的重组蛋白gD2具有良好的免疫原性及抗原性,为单纯疱疹病毒亚单位疫苗候选疫苗的选择提供了实验依据。
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