论文部分内容阅读
目的 探讨c-Myc在骨髓基质细胞介导的急性髓细胞白血病(AML)细胞耐药中的作用,从肿瘤微环境的角度探索AML耐药的分子机制.方法 将AML细胞系U937,KG1a及明确诊断AML患者的原代细胞与健康供者的骨髓基质细胞(MSC)共培养,以细胞单独培养作为对照.流式细胞术(FCM)及膜联蛋V(AnnexinV)/碘化丙啶(PI)双染色法比较两种培养条件下AML细胞对米托蒽醌诱导凋亡的差异；Western印记检测两种培养条件下AML细胞c-Myc蛋白的表达；在共培养体系中加入c-Myc抑制剂10058-F4或siRNA促使c-Myc沉默,检测AML细胞对米托蒽醌诱导的凋亡的变化；同时检测c-Myc下游抗凋亡蛋白和caspase-3,PAPR-1的表达,及影响血管新生的重要因子VEGF的表达改变.结果 AML细胞与MSC共培养后,对米托蒽醌诱导的凋亡均显著下降(P＜0.05),表明AML细胞通过与MSC共培养诱导其对化疗药物的耐药性；在共培养体系中,Western印记检测发现c-Myc蛋白的表达明显上调；c-Myc抑制剂10058-F4可诱导AML细胞的凋亡,加入共培养体系后,KG1a对米托蒽醌诱导的凋亡率从23.87％±1.55％显著升高到57.23％±3.88％(P=0.009),U937的凋亡率从16.07％±2.11％显著提高到53.47％±4.08％(P=0.004),在AML原代细胞中,凋亡率从42.2±2.05％提高到82.92±3.13％ (P=0.005),从而克服耐药.siRNA沉默c-Myc再次验证了在共培养体系中抑制c-Myc克服耐药的作用.Western印记法探索抑制c-Myc克服MSC介导耐药的作用机制,发现在共培养中,两个细胞系中均显示抗凋亡蛋白Bel-2,Bcl-xl高表达,血管新生因子VEGF高表达,而caspase-3凋亡途径中的caspase-3,PARP-1表达下调；而在共培养和单独培养两个体系中,分别加入c-Myc抑制剂或siRNA沉默c-Myc,促使Bcl-2,Bcl-xl和VEGF表达降低,caspase-3,PARP-1的表达提高.结论 AML细胞与MSC共培养可导致c-Myc蛋白表达的上调,进而促进其下游抗凋亡及血管新生通路的激活,抑制caspase-3凋亡信号通路,从而介导AML细胞对化疗药物的耐药；针对c-Myc的靶向治将为AML的治疗提供新思路.