【摘 要】
：
目的：研究流感病毒复合多表位核酸疫苗的构建及其表达产物的抗原性.方法：根据各表位基本独立的要求,结合计算机分析,以H3、H9亚型流感的HA抗原表位,H5、H7亚型的HA全基因,流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因Epi,将其克隆入真核表达载体pRIEneo,构建重组质粒pRI-Epi;将多表位抗原基
【机 构】
：
中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,长春,吉林省,130062
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛
论文部分内容阅读
目的：研究流感病毒复合多表位核酸疫苗的构建及其表达产物的抗原性.方法：根据各表位基本独立的要求,结合计算机分析,以H3、H9亚型流感的HA抗原表位,H5、H7亚型的HA全基因,流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因Epi,将其克隆入真核表达载体pRIEneo,构建重组质粒pRI-Epi;将多表位抗原基因Epi插入到融合表达基因H57中,构建重组质粒pRI-H57-Epi.将构建的重组质粒在CEF细胞中表达,并用免疫荧光方法初步检测该抗原蛋白的抗原性.结果：成功构建了融合表达载体pRI-Epi和pRI-H57-Epi,在CEF细胞中表达出流感病毒多表位抗原蛋白,免疫荧光法检测显示该蛋白具有良好抗原性.结论：流感病毒多表位抗原基因的设计是成功的,其在CEF细胞中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的人、禽流感疫苗侯选物.
其他文献
选择18头犊牛,随机分三组,每组分6头.对照组犊牛饮用奶中不加任何添加剂,试验Ⅰ、Ⅱ试验分别在犊牛饮用奶中加入1g魔芋甘露寡糖和细胞壁甘露寡糖.30d试验结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ组犊牛增重比对照组提高8﹪(14.67kg比13.58kg)和6﹪(14.39kg比13.58kg),经济效益分别比对照组提高22.4元和19.4元.魔芋甘露寡糖的增重和经济效益最佳.
本研究选用安装永久性瘤胃瘘管、十二指肠近端瘘管的利木赞×鲁西黄牛杂交一代公牛为研究对象,根据三个日粮NPN水平(0﹪,1﹪和2﹪尿素)和三个硫水平(0.150﹪、0.225﹪和0.300﹪),采用三期3×3拉丁方设计,研究了不同NPN和硫水平对肉牛营养物质代谢规律的影响和硫的适宜供给量.结果表明:同一尿素日粮条件下,添加0.150﹪-0.300﹪的无机硫可降低瘤胃氨氮浓度、硫的表观消化率和瘤胃乙丙
本文采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)弱毒Gt株免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过三次筛选克隆,获得2株具有分泌抗IBDV7D4、5D2两株杂交瘤细胞系,并对7D4株进行了详细鉴定.Western-blotting表明,能够特异地与IBDV43kd蛋白
本文利用特异性引物将从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到vp2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28-VP2.将pET-28-VP2转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约31ku的目的蛋白以可溶性形式表达于上清中.Western
禽网状内皮增生病病毒(REV)在鸡群中的感染非常普遍,但但对其自然感染造成的经济损失还一直估计不足.本文综述了我们在REV与其他病毒共感染的普遍性的流行病学调查结果以及REV及其与其他病毒共感染对禽流感和鸡新城疫灭活疫苗免疫反应的抑制作用的研究进展.
为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮增生病病毒(REV)共感染时的相互作用,本文分别在REV母源抗体阳性(REV-Ab+)和阴性(REV-Ab-)及经MDV疫苗CVI988株免疫和不免疫的商品代肉鸡,比较了二种病毒在病毒血症水平和特异抗体效价上的相互影响.结果表明,在未经CVI988株免疫鸡,REV病毒血症对MDV强毒接种后的病毒血症水平及抗体效价无明显影响,但REV病毒血症显著抑制了CV
本文经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的eDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序.在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组转移载体命名为pBHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数
该研究以本课题组克隆构建并于昆虫/杆状病毒表达系统中表达的禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)H5HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平.用致死剂量的HPAIVH5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100﹪的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡.
本文用"鸡源"禽流感H5N1亚型病毒株分别对肉用成年鸽和广场鸽进行人工感染试验,采用临床症状观察、病理剖检、病毒的分离、荧光RT-PCR和血凝抑制试验的方法,对不同阶段的试验鸽子和病毒的复制规律等进行了系统的观察和研究.结果表明(1)鸽子对禽流感H5N1亚型病毒易感性很差;(2)鸽子将与试验毒株同源性高的禽流感病毒传播给家禽的机率极低.本文还对鸽子H5N1亚型禽流感实验感染模型的建立、抗体反应及模
本文通过试验,测定鸡新城疫、禽流感(H5+H9亚型)二联灭活疫苗(LaSota+DG03+SS株)的免疫效力,结果表明疫苗安全、无应激;免疫抗体产生快,免疫后7天即产生较高水平的抗体;抗体水平高,免疫后21天三种抗体平均水平均达10Log2以上;整齐度好,个体间离散度及产生的三种抗体水平差异均较小;对禽流感H5亚型强毒的攻击有良好的保护力.