牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因的克隆、表达及免疫效果的评价

• 作 者: 龚瑞;胡长敏;郑露;郭爱珍;
• 机 构: 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北 武汉 430070,华中农业大学动物医学院,湖北 武汉 430070
• 出 处: 中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会
• 发表日期: 2009年期

运用PCR方法扩增出临床分离的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因，大小为1017 bp。将其与PMD 18-T载体连接，构建克隆载体。克隆载体酶切鉴定正确后采用亚克隆技术构建了重组表达质粒pET-28a(+)-ClfA，酶切鉴定及测序结果都表明获得了正确的原核表达质粒。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后，获得大小为46 KD左右的蛋白。Western blot分析显示，重组蛋白有很好的免疫原性。将纯化的蛋白与白油佐剂、弗氏佐剂和Seppic206佐剂乳化制成亚单位疫苗，经腹腔免疫小鼠。选取三种佐剂中血清抗体效价最高的免疫组进行间接免疫荧光试验、中性粒细胞调理吞噬试验及乳腺内金黄色葡萄球菌灌注攻毒试验。结果显示，与对照组相比，免疫组血清与金黄色葡萄球菌表面抗原结合能力及调理中性粒细胞吞噬细菌能力显著增强(p<0.05);攻毒后，免疫组乳腺内细菌数较对照组量显著降低(p<0.05)。以上研究结果表明ClfA配基结合区蛋白具有良好的生物活性及免疫原性，且能够对小鼠乳腺炎模型提供一定的保护力，说明该基因有望作为亚单位疫苗预防奶牛乳腺炎有效的候选抗原。