【摘 要】
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目的：探讨环状RNA 在4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和脂多糖(LPS)联合暴露致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)炎症反应中的调控作用。方法：通过circRNA表达谱芯片筛选差异表达的circRNA；通过细胞核质分离、RNase R 酶和放线菌素D 处理实验分析circRNA 的特性；干扰和过表达circRNA 后,采样ELISA 方法分析circRNA对细胞炎症的调
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院 广州,511436
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：探讨环状RNA 在4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和脂多糖(LPS)联合暴露致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)炎症反应中的调控作用。方法：通过circRNA表达谱芯片筛选差异表达的circRNA；通过细胞核质分离、RNase R 酶和放线菌素D 处理实验分析circRNA 的特性；干扰和过表达circRNA 后,采样ELISA 方法分析circRNA对细胞炎症的调控作用。双荧光素酶报告基因和FISH 实验检测circRNA 与miRNA 的结合情况；Western blot 实验检测miRNA 靶基因的蛋白水平以及circRNA 和miRNA 对蛋白的调控情况。结果：将NNK+LPS 染毒后的BEAS-2B 细胞进行circRNA 的高通量芯片检测,qRT-PCR 分析发现环状RNA 0035266(circ_0035266)在NNK+LPS 染毒后的BEAS-2B 细胞中表达显著上调。干扰了circ_0035266 后,BEAS-2B 细胞上清中的IL-6 和IL-8 水平降低,而过表达circ_0035266 后,得到相反的结果。核质分离实验表明,circ_0035266 更多地分布在BEAS-2B 细胞的胞质中,提示其ceRNA 的作用机制。生物信息学预测miR-181d-5p 与circ_0035266 具有3 个结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实circ_0035266 和miR-181d-5p 具有结合关系,FISH 实验证明circ_0035266 与miR-181d-5p 共同定位于BEAS-2B 细胞的胞质中。进一步研究发现,DDX3X 是miR-181d-5p 的一个靶蛋白,并且其蛋白水平受circ_0035266 的正向调控。干扰DDX3X降低BEAS-2B 细胞上清中的IL-6 和IL-8 水平,而过表达DDX3X 后,细胞上清中的IL-6 和IL-8 水平升高。将circ_0035266 siRNA 和过表达质粒分别与miR-181d-5p mimic、DDX3X 过表达质粒共同转染BEAS-2B 细胞后,Western Blot 实验检测DDX3X 的蛋白水平发生显著改变,并且BEAS-2B 细胞上清中的IL-6 和IL-8 水平也发生相应改变。结论：本研究发现circ_0035266 能够通过miR-181d-5p/DDX3X 分子轴调控NNK 和LPS联合暴露所致的细胞炎症反应。
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