CCL20基因敲低型组织工程皮肤种子细胞的克隆筛选及其干扰效果

来源 :中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanxiant
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  目的:采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),筛选出稳定干扰CCL20基因表达的细胞克隆并检测其干扰效果.方法:用CaCl2法将已构建好的3种pHSER-CCL20-shRNA-GFP载体(pHCG-1和pHCG-2为CCL20基因特异性,pHCG-3为CCL20基因错配)转染293FT包装出慢病毒颗粒,流式细胞术测定其病毒滴度.用G418压力筛选慢病毒感染的HaCaT,荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测CCL20基因mRNA和蛋白的表达水平,以判断其特异性干扰效果.结果:三种慢病毒载体所包装出的慢病毒滴度分别为7.08×105 TU/ml、1.88×105 TU/ml和2.08×105转导单位(TU)/ml;感染后的HaCaT经过G418筛选5~8周,获得4株CCL20基因特异性的细胞克隆(HaCaT-1、HaCaT-2、HaCaT-3和HaCaT-4)及2株CCL20基因错配对照的细胞克隆(HaCaT-5和HaCaT-6).
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