【摘 要】
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目的：建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法.方法：取新生24h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打
【出 处】
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中国中西医结合麻醉学会年会暨第二届全国中西医结合麻醉学术研讨会
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目的：建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法.方法：取新生24h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打次数及细胞接种2h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基的培养方法,MTT比色法分析检测神经元细胞成活率；于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态；利用神经元特异性标志物微管蛋白相关标志物2(microtubule associated protein 2,MAP2)鉴定神经元纯度.结果：木瓜蛋白酶明显增加原代培养神经元细胞活力(P＜0.01),采用适度的机械吹打、实验前多聚赖氨酸铺板及细胞接种2h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基,对神经细胞的活力没有明显的影响(P＞0.05).大部分皮质神经元具有典型的神经元形态特征；经MAP2免疫荧光技术鉴定神经元所占比例达95％以上.结论：该方法操作简单、高效、方便可行,结果稳定.
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