【摘 要】
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目的 探讨重组人腺病毒p53 (rAd-p53)对不同p53-mdm2反馈环状态的宫颈癌细胞放射敏感性影响.方法 先采用Western blot法检测了两种宫颈癌细胞系(Siha细胞系和C33a细胞系)初始p53和mdm2状态,然后,以rAd-p53分别感染含野生型p53基因的宫颈癌细胞Siha和含突变型p53基因的宫颈癌细胞C33a,测定经rAd-p53处理后不同时间p53表达水平的变化.采用W
【机 构】
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北京大学肿瘤医院放疗科 北京市海淀区阜成路52号,100142 北京大学肿瘤医院介入科 北京市海淀
【出 处】
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北京大学医学部近距离放疗研究中心成立大会暨北京大学第三届国际放射肿瘤学术论坛
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目的 探讨重组人腺病毒p53 (rAd-p53)对不同p53-mdm2反馈环状态的宫颈癌细胞放射敏感性影响.方法 先采用Western blot法检测了两种宫颈癌细胞系(Siha细胞系和C33a细胞系)初始p53和mdm2状态,然后,以rAd-p53分别感染含野生型p53基因的宫颈癌细胞Siha和含突变型p53基因的宫颈癌细胞C33a,测定经rAd-p53处理后不同时间p53表达水平的变化.采用Western blot、细胞免疫化学和免疫荧光检测rAd-p53、照射6Gy和rAd-p53感染48 h后照射6Gy三种不同条件对两种细胞中p53、mdm2、p21和bax表达情况的影响.细胞克隆形成法检测放射增敏比,流式细胞法检测不同处理方法对细胞凋亡和周期的影响.结果 Western blot结果显示：Siha细胞初始p53和mdm2均为低表达,C33a细胞初始p53和mdm2均为高表达,50 MOI rAd-p53分别感染两种细胞,感染24h、48h、72h、96h后,两种细胞均在感染48h后p53表达水平最高,96h后仍有表达.两种细胞均分4组(空白对照组,感染rAd-p53组、照射6Gy组和感染rAd-p53 48 h后照射6Gy组),感染rAd-p53组、照射组以及感染rAd-p53+照射组经处理后,Western blot、细胞免疫化学和免疫荧光检测均显示,p53、mdm2、p21和bax均较空白对照组表达上调.细胞生长曲线显示,感染48h后照射6Gy两种细胞生长抑制率分别为49.1％和78.2％ (P＜0.01),Siha细胞和C33a细胞的6Gy放射增敏比(SER)分别为1.18和1.27；流式细胞分析显示,两种细胞感染rAd-p53后细胞周期阻滞主要在G2/M期,Siha细胞的4组细胞凋亡率(Q2+Q4)分别为5.5％、6.7％、8.5％和12％.结论 rAd-p53能显著抑制宫颈癌细胞生长、诱导细胞凋亡并提高细胞的放射敏感性,其对p53-mdm2高表达的宫颈癌细胞(Siha细胞)作用强于低表达的宫颈癌细胞(C33a细胞),表明不同内源性P53-mdm2状态的宫颈癌细胞对rAd-P53治疗及其协同的放疗敏感性可能不同.
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