【摘 要】
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目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)诱导兔脂肪干细胞(ADSCs)复合藻酸钙凝胶三维培养构建组织工程化骨的可行性.方法：取清洁级3月龄健康新西兰大白兔2只,雌雄不拘,体重
【出 处】
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海峡两岸骨科专委会学术交流会、抗震救灾五周年学术研讨会暨第十届华西国际骨科论坛
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目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)诱导兔脂肪干细胞(ADSCs)复合藻酸钙凝胶三维培养构建组织工程化骨的可行性.方法：取清洁级3月龄健康新西兰大白兔2只,雌雄不拘,体重2.5～3.5kg.取双侧腹股沟区皮下脂肪垫,Ⅰ型胶原酶消化离心贴壁法分离培养ADSCs,取第三代细胞进行实验.倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,采用细胞表面抗原CD44、CD45免疫荧光染色法鉴定ADSCs.调整细胞密度为2×10s个/ml,分为两组：对照组加入含10-2 mol/Lp-甘油磷酸钠、10-7mol/L地塞米松、50mg/L抗坏血酸、体积分数为10％的胎牛血清的DMEM/F-12骨诱导培养基,实验组在此基础上加入1.5μg/L降钙素基因相关肽进行诱导培养.MTT法检测细胞增殖情况,分别行碱性磷酸酶、茜素红染色观察及成骨鉴定,RT-PCR法检测诱导细胞Ⅰ型胶原和骨钙素(OC)mRNA的表达,分别于诱导后1,2,3,4周检测两组的碱性磷酸酶(ALP)和钙离子浓度并作统计分析.结果：ADSCs形态多为梭形,呈"漩涡状"排列；表面抗原CD44呈阳性,CD45呈阴性；细胞增殖曲线为"S"型,两组在1,3,5,7,14,21d的光吸收值(OD)比较差异有统计学意义(P＜0.05,n=6)；诱导2周后两组细胞碱性磷酸酶、茜素红染色均为阳性,但实验组钙化结节明显较对照组增多.诱导7,14d实验组Ⅰ型胶原和骨钙素mRNA的表达均强于对照组.碱性磷酸酶(或钙离子)浓度在实验组与对照组之间存在组间差异,在各个时间点实验组碱性磷酸酶(或钙离子)浓度均高于对照组(P＜0.05,n=4)；实验组碱性磷酸酶(或钙离子)浓度在不同诱导时相其浓度变化的趋势不同(P＜0.05,n=4).结论：CGRP不仅在成骨细胞体外培养过程中有促进作用,在藻酸钙凝胶载体上同样具有促脂肪干细胞向成骨细胞分化的作用,有望成为骨缺损修复的一种组织工程方法.
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