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血清中内源性肽在疾病诊断方面的研究已成为热点，其中内源性磷酸肽的研究也日益引起关注，其相对含量的变化可能会与某些疾病密切相关1。二甲基化标记具有反应完全、快速、试剂价格低廉等优点，已广泛的应用于蛋白组学的相对定量。然而，标记溶剂不能含有伯胺，蛋白酶解液需要经过除盐过程，并且终止反应会产生氢气等危险气体。C18柱上衍生虽解决了以上问题，但其对于磷酸肽，尤其衍生后的磷酸肽保留作用较弱，会造成样品损失。此外，C18柱上衍生常用于大量样品，微量样品的标记也会受到限制。本研究中，我们使用介孔材料EPO-Ti4+富集内源性磷酸肽，并在介孔材料上实现同位素衍生化标记，实现了将除盐、富集、标记在一步内完成。同时，进行淋洗除去未反应的标记试剂终止反应，避免了危险气体的产生。