【摘 要】
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目的：来源于近平滑假丝酵母CCTCC M203011的(S)-羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)能够催化2-羟基苯乙酮转化为(S)-苯基乙二醇,但效率却不尽人意.Sortase作为一种“分子订书机”可以将蛋白
【机 构】
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江南大学生物工程学院,教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡214122
【出 处】
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中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会
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目的：来源于近平滑假丝酵母CCTCC M203011的(S)-羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)能够催化2-羟基苯乙酮转化为(S)-苯基乙二醇,但效率却不尽人意.Sortase作为一种“分子订书机”可以将蛋白质进行定点连接,连接后的蛋白质功能得到了加强.本次研究中,将金黄色葡萄球菌中的sortase A构建SCRⅡ寡聚体,通过在其C端添加GGGGSLPETGG序列,以其N端存在的Gly作为亲核试剂,在sortase A的介导下进行连接反应,经过条件优化后,几乎所有的SCRⅡ单体都被连接成二聚体或三聚体,得到的这些SCRⅡ寡聚体相比于原始酶SCRⅡ在催化2-HAP时活性提高了6倍,催化效率提高了4倍,并且在pH5.0-9.0和10℃-50℃的范围里更加稳定.生物转化结果显示,SCRⅡ寡聚体能够在3小时内将2-HAP(5g/L)完全还原为(S)-PED,且光学纯度为100％,相比于E.coli-SCRⅡ,SCRⅡ寡聚体将转化时间缩短了16倍.本次研究首次将sortase A应用于氧化还原酶的连接,并显著提高了SCRⅡ的催化效率和热稳定性,表明sortase在手性催化中有很大的潜在应用价值.
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