【摘 要】
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目的:在毕赤酵母中表达带有TAT多肽的人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),为探讨GDNF-TAT用于帕金森病的治疗奠定基础.方法:用
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆,163319
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目的:在毕赤酵母中表达带有TAT多肽的人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),为探讨GDNF-TAT用于帕金森病的治疗奠定基础.方法:用密码子优化法合成人GDNF基因序列连在pPICZαA,用PCR方法分别在上游引入TAT位点与XbaⅠ酶切位点,下游设计扩增pPICZαA上的α-因子序列.然后插入pPICZαA载体中,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,对其进行PCR和双酶切并测序鉴定,构建GDNF-TAT在毕赤酵母表达质粒pPICZαA-GDNF-TAT.电击转化毕赤酵母GS115,对阳性克隆进行诱导表达后经SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白.结果:双酶切pPICZαA-GDNF-TAT后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为3.1 kb和432 bp片段,表明目的片段已插入载体中,经序列测定其含有完整的GDNF-TAT基因片段,Western 印迹结果显示含有pPICZαA-GDNF-TAT的毕赤酵母GS115能分泌表达GDNF-TAT.结论:成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA-GDNF-TAT,并能在毕赤酵母GS115中分泌表达GDNF-TAT.
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