【摘 要】
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目的 建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析方法.
【机 构】
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河北农业大学理工学院,沧州,061100暨南大学食品安全与营养研究院,广州,510000;天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津,300232;北京艾旗斯德科技有限公司,北京,101102;广州双螺
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目的 建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析方法.方法 针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物.对该方法进行特异性验证,同时对大肠杆菌O157∶H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限进行测定,对61份牛肉样品进行RF-LAMP检测,并与GB 4789.36-2016方法进行比较,评价RF-LAMP方法的敏感性、特异性和准确度.结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果,21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该方法特异性良好.纯培养物检测的灵敏度为5.1 CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g.结论 本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避免了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义.
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