番茄遗传转化与筛选鉴定的改进研究

• 作 者: 祁春芳 王婷 刘霞宇 石晓雯 于治芹 刘世芳 梁
• 机 构: 山西省桑干河杨树丰产林实验局,山西农业大学生命科学学院
• 出 处: 西北农业学报
• 发表日期: 2018年04期
• 关键词: 番茄 种子消毒 遗传转化 Kan筛选
• 基金项目: 国家自然科学基金(31101555);山西农业大学研究生创新项目(20143058);山西农业大学科技创新基金(2018);山西省高等学校优秀青年学术带头人项目(2012);山西人才引进与开发专项(614191);山西省农业科技成果转化和推广示范项目(2018-5)~~

将At-pri-miR828基因的过表达载体pC2300-pOT2-At-pri-miR828通过农杆菌侵染法转入番茄（Solanum lycopersicum L.）品种‘Ailsa Craig’为例,来对番茄的遗传转化过程中番茄种子消毒处理、无菌苗培养、转基因阳性植株的Kan筛选浓度、PCR检测等方法进行研究,旨在探索一套快速高效的番茄遗传转化及鉴定方法。研究发现:采用C₂H₅OH、Na₃PO₃及NaClO分别浸泡及无菌水反复冲洗的种子消毒方法,可使污染率减少到5%以下;种子震荡培养法可以提高发芽率并促进种苗的生长势一致;筛选转基因阳性植株的Kan最佳质量浓度为100mg·L^-1;100mg·L^-1的Kan溶液浇灌蛭石和在MS培养基中添加Kan的方法都可以用来筛选转基因番茄。最终Kan筛选和PCR检测等鉴定方法显示番茄的遗传转化效率为32.5%。