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头癣是儿童常见的浅部真菌病。进入90年代以来,随着饲养宠物的热潮,我国头癣发病率有上升趋势。北京儿童医院报告的头癣病例,在1993-1994年为93例,是同期皮肤病人的0.16%,占儿童真菌病人的30.7%;到2003-2004年上升为495例,是同期皮肤病人的0.29%,占儿童真菌病人的47.6%;2005-2006年的头癣病例253例,占同期皮肤病人的0.22%,占儿童真菌病人的38.1%。头癣的治疗主要依靠系统性应用灰黄霉素;90年代后,新型抗真菌药物特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、环吡酮胺等逐渐投入临床使用,为控制各种真菌感染发挥了作用。引起头癣的病原真菌的种类差别较大,而且不同的真菌对于同一种药物的敏感性以及同一种真菌对不同的药物的敏感性,往往存在很大的差异;因此,为了临床上正确选择高效敏感的抗真菌药物,制定更为合理的治疗头癣的方案,有必要建立有关头癣的病原菌抗真菌药物敏感性的测定方法,并利用这种方法测定引起儿童头癣的病原真菌对常用抗真菌药物的敏感性。
目的:1、探索犬小孢子菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验的条件;2、了解北京地区儿童头癣病原菌对常用的抗真菌药物的敏感性;3、探索抗真菌药物环吡酮胺可能的作用机制。
方法:1、利用常规方法对头癣病原真菌进行培养、鉴定;2、参照美国国家临床和实验室标准化研究所(Clinicalandlaboratorystandardinstitute,CLSI)制定的产孢丰富丝状真菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验方案(M38-A),探讨犬小孢子菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验时,合理的接种菌量、培养基成份、孵育温度和时间、以及终点判读标准等条件;3、根据我们建立的方法,并参照CLSI的M38-A方案,测定灰黄霉素、伊曲康唑、特比萘芬、联苯苄唑、氟康唑、阿莫罗芬、酮康唑、环吡酮胺等8种常用抗真菌药物对202株来自北京地区儿童头癣病原真菌(包括182株犬小孢子菌,11株须癣毛癣菌,5株紫色毛癣菌,4株石膏小孢子菌)的最小抑菌浓度(MIC),并进一步了解其最小杀菌浓度(MFC);4、利用微量液基稀释法和纸片扩散法,测定抗真菌药物环吡酮胺杀伤犬小孢子菌时铁离子的作用。
结果:1、犬小孢子菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验时,接种浓度为1-3X104cfu/ml;使用沙氏液体培养基测定的结果,除伊曲康唑、联苯苄唑、阿莫罗芬外,其它受试药物的MIC均较使用RPMI-1640时明显升高;孵育温度为28℃,而孵育时间犬小孢子菌为5天、紫色毛癣菌9天、须癣毛癣菌和石膏小孢子菌4天;终点判读标准,与生长对照孔相比,灰黄霉素、伊曲康唑、联苯苄唑、二性霉素B、阿莫罗芬、酮康唑选取50%生长受抑,而特比萘芬和环吡酮胺选取100%生长受抑时的最低药物浓度的孔;2、氟康唑的MIC较高为27.733μg/ml,属于剂量依赖性敏感;其余药物MIC的几何均数分别为:阿莫罗芬0.0139μg/ml,特比萘芬0.051μg/ml,伊曲康唑0.294μg/ml,联苯苄唑0.518μg/ml,灰黄霉素0.627μg/ml,酮康唑0.756μg/ml,环吡酮胺0.763μg/ml;药物对24株菌MFC的几何均数分别为灰黄霉素1.414μg/ml,伊曲康唑2.594μg/ml,环吡酮胺0.841μg/ml,酮康唑3.776μg/ml,联苯苄唑2.059μg/ml,特比萘芬0.062μg/ml,阿莫罗芬0.029μg/ml,24株菌MIC和MFC的几何均数经过统计学分析,伊曲康唑、环吡酮胺、阿莫罗芬无明显差异,其余4种药物均有明显差异;3、铁离子可以降低抗真菌药物环吡酮胺对犬小孢子菌的抑菌活性;4、近平滑念珠菌ATCC22019可以用于环吡酮胺抗真菌药物敏感性试验时的质量控制菌株,24-48h时其范围0.5-2μg/ml。
结论:各种药物的MIC之间的差异有显著性,M38-A方案有较好的重复性和稳定性,可作为一种较好的方法在实验室中应用。头癣病原菌对灰黄霉素,尤其是特比萘芬、伊曲康唑等新一代药物的敏感性较好,未发现耐药株。