巴斯德毕赤酵母PEP4基因的剔除及对基因工程单体胰岛素前体表达的影响

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为了防止基因工程表达产物被降解,目前较为流行的一种策略是构建蛋白酶缺失菌株,从而提高产量及外源蛋白表达的分泌效率。我们先前通过转化成功构建了能分泌单体胰岛素前体(MIP)的巴斯德毕赤酵母,本文主要是通过构建质粒pRS306/PEP4L&R,置换巴斯德毕赤酵母GS115/(B27K-DtrI)MIP中的PEP4基因。剔除PEP4基因有利于减少胞外产物的降解。将置换后的pep4-菌株与原菌株比较,外源蛋白表达产物:单体胰岛素前体MIP的表达量得到提高。实验结果表明:对于控制胰岛素前体降解来说,剔除毕赤酵母中的PEP4基因是一种有效的方法。与此同时,我们为将来其他外源蛋白在毕赤酵母中的表达优化提供一种通用且有效的途径:即剔除野生型菌株中的PEP4基因,构建蛋白酶缺失的菌株。
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