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在当前的研究中,我们发现PLZF缺陷小鼠的胸腺细胞总数与野生型小鼠相比减少,早期T细胞祖细胞（ETP）数目减少,但PLZF缺陷小鼠的胸腺细胞减少不是造血干细胞内在性的原因。通过PLZF-EGFP报告基因小鼠和新生小鼠胸腺的肾移植模型,我们发现PLZF在Rag2/γc-/-受体小鼠胸腺移植物DN1（Lineage-CD44+CD25-）细胞中高表达,且供体细胞PLZF的缺失会显著影响胸腺移植物的DN1细胞中来源于供体细胞的比例。综上所述,T细胞的正常分化发育不一定需要PLZF基因的参与,但很可能参与维持T细胞早期祖细胞的自我更新。本研究的目的是PLZF基因在小鼠T细胞早期发育和自我更新中的功能探究,主要包括四部分:第一,PLZF基因是否促进小鼠造血干细胞产生;第二,PLZF基因缺失对小鼠的胸腺细胞减少是否为造血干细胞内在性的;第三,PLZF在新生小鼠胸腺移植模型的移植物DN1细胞中高表达。第四,PLZF缺失可能影响新生小鼠胸腺移植模型的供体DN1细胞自我更新。现将研究内容总结如下:1.本研究以PLZF基因野生型和报告基因（PEG）小鼠为研究材料,采用RT-PCR和流式细胞术等方法对造血干细胞（LSK,Lineage-Sca-1+c-Kit+）进行开窗分析得出:LSK细胞分为HSC(LSK Flt3lo)和LMMP(LSK Flt3hi)两群。HSC细胞拥有向血液细胞各个谱系发育的全能性,而LMMP细胞被认为是T细胞的前体,其迁移至胸腺后启动T细胞的发育程序PEG小鼠的HSC细胞表达较高水平的GFP,而其LMMP细胞的GFP水平与C57BL/6小鼠相当。这说明PLZF基因在骨髓的HSC细胞中表达,而随后在LMMP细胞中表达沉默。综合PEG小鼠骨髓和胸腺细胞的实验结果,我们认为PLZF在造血干细胞HSC中表达。2.本研究以PLZF基因野生型和缺陷型(PLZF-/-)小鼠为研究材料,明确PLZF缺陷小鼠的胸腺细胞减少不是造血干细胞内在性的。我们分别将PLZF+/+（CD45.1+）和PLZF-/-（CD45.2+）小鼠经免疫磁珠分选后富集的Sca-1+骨髓细胞按1:1等量混合作为供体细胞,经注射给预先经亚致死剂量辐射过的受体小鼠(Rag2/γc-/-),两月后取胸腺进行流式细胞术分析。Rag2和γc双基因缺陷使得受体小鼠自身的T、B和NK细胞都不能正常发育,只能完全来源于外源的供体细胞。结果显示,在经骨髓移植的受体小鼠胸腺细胞中,PLZF+/+和PLZF-/-来源的细胞比例大致相等,且均能在胸腺中进行正常的T细胞发育。此外,在移植后的2、6个月取受体小鼠的脾脏进行分析,发现脾脏的B细胞和T细胞中,PLZF+/+（CD45.1+）来源的细胞比例基本保持恒定,维持在50%左右,说明PLZF-/-（CD45.2+）细胞在竞争中并不处于劣势。以上结果证明PLZF缺陷小鼠的胸腺细胞减少不是由于造血干细胞内在性的原因。3.将新生C57BL/6或PEG小鼠的胸腺取下,移植于受体小鼠Rag2/γc-/-的肾被膜下,1个月后取胸腺移植物进行分析。我们利用流式细胞术对CD4-CD8-TCRβ-（简称为TN）的胸腺细胞进行开窗分析,将DN1细胞（CD44+CD25-TN）按γc的表达水平,区分为供体细胞（γc+）和受体细胞（γc-）。通过对来源于PEG小鼠的供体细胞进行GFP荧光强度分析,我们发现PLZF在胸腺移植物的DN1细胞中高表达,甚至高于阳性对照iNKT细胞。4.将新生PLZF+/+或PLZF-/-小鼠的胸腺取下,移植于受体小鼠Rag2/γc-/-的肾被膜下,1个月后取胸腺移植物进行分析。我们利用流式细胞术,对TN胸腺细胞进行开窗分析,将DN1细胞（CD44+CD25-TN）按γc的表达水平,区分为供体细胞（γc+）和受体细胞（γc-）。结果显示,PLZF基因可能对T细胞的正常分化发育不是必须的,但很可能参与维持T细胞早期祖细胞的自我更新。