【摘 要】
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[目的]多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚.[方法]以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚.[方法]以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素毒性模型,不同剂量黏菌素(0-200 μM)处理24h后,细胞活力(MTT法)、细胞膜损伤程度(LDH活力)、细胞死亡方式(Hoccest33342及AV/PI法)、氧化应激标志物(ROS、SOD、GSH、CAT)、线粒体功能(线粒体膜电位、Bcl-2/Bax)、自噬标志物(LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62)及caspase-3、8及9活力被分别检测；并进一步通过自噬抑制剂(氯喹,CQ)及凋亡抑制剂(caspase泛抑制剂,Z-VAD-FMK)联合探究细胞自噬及凋亡的cross-talk机制.[结果]与对照组相比,黏菌素处理的N2a发生凋亡性细胞死亡并伴随明显的剂量依赖性(黏菌素200μM,细胞凋亡率达49％)；进一步研究发现,黏菌素可显著增加细胞内ROS水平、同时抑制细胞内抗氧化酶SOD、CAT活力及抗氧化物质GSH活力(all p＜0.05 or 0.01)；此外,黏菌素处理可导致线粒体膜电位及Bcl/Bax比值显著降低,并伴随caspase-3、8及9活力的显著升高(all p＜0.05 or 0.01)；MDC法荧光观察及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62检测发现,黏菌素可剂量依赖性激活N2a细胞内自噬水平,进一步通过LC3及activated-caspase-3免疫荧光共染证实黏菌素诱导的自噬及凋亡发生于同一细胞.与黏菌素模型组相比,晚期自噬抑制剂CQ可明显激活黏菌素(200μM)诱导的细胞凋亡(凋亡率增至85％),caspase--3酶活力也被进一步激活.CQ+Z-VAD-FMK+colistin联合处理后可明显抑制CQ+colistin诱导的细胞凋亡及caspase-3活力及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62的激活.[结论]黏菌素介导神经元细胞凋亡涉及ROS介导的氧化应激及线粒体功能失调,从而导致caspase依赖性的凋亡和自噬；自噬可能扮演者保护性角色.
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