银杏黄酮与阿托伐他汀联合降脂作用的研究.pdf

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编号:20190130233637862657    类型:共享资源    大小:6.27MB    格式:PDF    上传时间:2019-02-16
  
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阿托伐他汀 作用的 与阿托伐他汀 联合阿托伐他汀 降脂作用 作用的研究 伐他汀 降脂的作用
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医药前沿 91 论 著 2013年1月 异的 p53 基因,使肿瘤细胞对放射及化疗敏感性明显提高 [4]。本研究结 果显示对照组完全缓解 1 例 , 部分缓解 4 例,有效率 45.45%。观察组完 全缓解 5 例 , 部分缓解 2 例 , 有效率 82.35%, 观察组肿瘤消退情况高于 对照组 , 有显著性差异 (P0.05);④ The lipid thickness of single ginkgo flavone group is not significant change compared with model (P0.05); lipid thickness of atorvastatin group and the compound group has significant changes compared with model group(P < 0.05). Conclusion: Ginkgo biloba flavone combinated with atorvastatin drugs can apparently improve the effect of lipid-lowering. 【Key words】Ginkgo flavone atorvastatin lipid-lowering effect 92 医药前沿 论 著 2013年1月 以上试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司 油红O染液 ( Solarbio ); 苏木精染液(AMRESCO); 伊红染液(批号:F20100728,国药集团化学试剂有限公司); 中性树胶(批号:20110104,国药集团化学试剂有限公司); 石蜡(熔点:60-62° C,上海宏兹实业有限公司); 1.3 实验仪器:低温高速离心机(Sigma 型号:3K15);全自动 生化分析仪(爱尔兰蓝宝石 型号:ADS6000);KD-T 电脑生物组织 摊烤片机(浙江省金华市科迪仪器);KD202A 轮转式切片机(浙江省 金华市科迪仪器);电热恒温干燥箱(MODEL SKG-02.500 黄石恒丰 医疗器械有限公司) ;显微镜(Motic 型号:BA210); 2 实验方法 2.1 高血脂模型分组建立及降血脂药物给药方案 选取 SPF 级雄性金黄地鼠随机分配成 5 组每组 12 只。分别为空白 对照组、高脂模型组、银杏黄酮组、阿托伐他汀组、银杏黄酮与阿托伐 他汀复方给药组。空白对照组与高脂模型组灌胃蒸馏水,阿托伐他汀组 灌胃阿托伐他汀剂量为 2.25mg/kg(按临床有效量 10mg/kg 的 1/4, 折算成小鼠的给药剂量。);银杏黄酮组给予银杏黄酮剂量为 1.152mg/ kg;复方给药组灌胃复方药剂量为 2.25mg/kg+1.152mg/kg,所有动 物连续饲养,灌胃六周。 2.2 体重变化监测 监测动物每天体重变化并记录,各给药组与模型组比较,监测是否 有显著差异。 2.3 血清 TC、TG、HDL、LDL 的检测:按照 2.1 中方法饲养和 灌胃六周后,所有金黄地鼠禁食 12 小时。断头取血,分离血清、使用全 自动生化分析仪测定血清中 TC、TG、HDL、LDL 的含量,具体方法参 考试剂盒说明书。比较模型对照组和空白对照组的差异显著性 , 若两组 具有显著差异性则说明高血脂模型建立成功。 2.4 各脏器指数的计算:断头取血后取出肝脏、肾脏及腹主动脉组 织,称重肝脏并观察肝脏表面形态变化。计算动物肝脏指数、肾脏指数。 2.5 肝脏、肾脏、腹主动脉组织石蜡切片的制作 ①固定:将灌胃 6 周的金黄地鼠肝脏、肾脏、腹主动脉组织置于 4% 的多聚甲醛液中固定。 ②脱水:取肝脏一页切成 1cm×1cm×(0.3 ~ 0.5)cm 大小的小 块,左肾切取一半,腹主动脉组织上段剪取约 3 ~ 5mm,将以上组织 分别依次浸入 70% 酒精 2h → 80% 酒→ 2h → 90% 酒精 2h → 95% 酒精 2h → 100% 酒精 2h。 ③透明:将组织浸在纯二甲苯溶液中,更换两次溶液,每次 1h。 ④浸蜡:将石蜡在恒温箱中熔化后冷凝,反复三次,使其中所含的 挥发性物质蒸发, 将上述透水透明后的组织浸在65℃熔融的石蜡中过夜。 ⑤包埋:包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中,先将熔融的蜡置 于蜡杯中,同时将镊子和包埋模具一起放置在恒温箱中预热,然后迅速 用预温的镊子夹取组织放置在模具底部,将主动脉横切面当作包埋面的 参照面。迅速将蜡杯中熔融的石蜡倒入模具中,冷凝十五分钟后,取出 蜡块。 ⑥切片:将蜡块固定在切片机上,调整刀片方向到适宜位置,切片 厚度调成 8μm 进行切片,每个样本作三个切片。 ⑦贴片:将切片置于 35℃水中,用涂有蛋白甘油的载玻片捞片, 在 60℃的烤片机上烤干,使组织固定在载玻片上,以便于染色和镜检。 2.6 染色封片 2.6.1 HE 染色 ①将肝、肾组织石蜡切片分别置于染色架上,于二甲苯Ⅰ中脱蜡 5 分钟,二甲苯Ⅱ中继续脱蜡 5 分钟。 ②将切片置于 100% 酒精Ⅰ 5 分钟→ 100% 酒精Ⅱ 5 分钟→ 95% 酒 精 3 分钟→ 90% 酒精 3 分钟→ 80% 酒精 3 分钟→ 70% 酒精 3 分钟→蒸 馏水 3 分钟。 ③苏木精染液染色 10 分钟,自来水冲洗玻片多余染液,冲 5-10 分 钟,再到盐酸乙醇分色数秒,镜检控制,直至细胞核及核内染色质清晰 为止。 ④自来水冲洗数分钟,1% 氨水蓝化,镜检后再自来水冲洗数秒, 伊红染液染色 2 分钟。 ⑤切片置于 70% 酒精数秒→ 80% 酒精数秒→ 90% 酒精数秒→ 95% 酒精 3 分钟→ 100% 酒精Ⅰ 5 分钟→ 100% 酒精Ⅱ 5 分钟。 ⑥二甲苯Ⅰ中脱水 5 分钟,后在二甲苯Ⅱ中脱水 5 分钟。除去载玻 片上多余的水分以后,用甘油明胶封片。 2.6.2 油红 O 染色 ①脱蜡:将腹主动脉石蜡切片置于 72 度的恒温箱中烤片 20min, 用 80 度以上的蒸馏水冲洗 1min, 在更换三次 70 度左右的热水冲洗。 ②染色:将配置好的油红O染液滴于切片上 10min. 用 6% 的异丙 醇除去多余的染液,苏木素复染细胞核 3min, 自来水冲洗 10min,盐酸 酒精分化 3-5s,氨水返蓝 5s,自来水冲洗 10min. 除去载玻片上多余的 水分以后,用甘油明胶封片。 2.7 显微镜下观察肝、肾、腹主动脉组织切片病理组织学染色结果 分别在 10×10 倍和 10×40 倍镜下观察每张切片的肝、肾病理学改 变以及腹主动脉内膜层变化,并在 10×40 倍镜下,测量腹主动脉内壁脂 质厚度,取平均值,用 μm 表示。 2.8 数据处理:统计学处理所有实验数据以 x -±s 表示,采用 Microsoft 公司 Excel 2007 软件、SPSS 13.0 软件作进行 t 检验分析。 以 P 0.05) , 提示银杏黄酮不具有显著的降低血脂的作用。复方给药组组与模型组比 较对于血脂各成分CHOL、 LDL、 TG具有显著的影响 (P0.05), 阿托伐他汀组、银杏黄酮 + 阿托伐他汀 复方给药组与模型组比较有显著性差异(P0.05、P0.01),说明长 期使用单味药银杏黄酮不具有显著降血脂作用,而使用银杏黄酮 + 阿托 伐他汀复方药具有增加降血脂效力的作用。(结果见表 4、图 6) 表 4 各组腹主动脉脂质厚度(μm) 组别腹主动脉脂质厚度(μm) 空白对照组15.05±2.92 高脂模型组34.06±3.15# 阿托伐他汀组19.26±1.44** 银杏黄酮组25.57±3.62 复方给药组18.27±1.80** #P < 0.001 VS 空白组 ;* P < 0.05 VS 模型组 ;** P < 0.01 VS 模型组 图 6 不同给药组腹主动脉脂质厚度变化 4 讨论 正常情况下 , 除脂肪细胞外其他细胞内一般不见或仅见少量脂滴。 在病理状态下如这些细胞中出现脂滴或脂滴明显增多 , 特别是在肝、肾 等实质器官发生脂肪变性时 , 胞浆内出现大小不一的空泡 , 这时用脂肪 染色来鉴别脂肪变性。 在实验过程中,用 HE 染色方法并在显微镜下镜检,我们可以观察 到模型组小鼠肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿胀甚至呈气球样变,胞质充 满微小脂泡,细胞核大量消失,与正常肝组织比较体积明显增加,肝脂 变程度随高血脂症状的持续而逐渐加重。各给药组细胞体积恢复正常, 肝索排列整,齐规则,胞质中的小脂泡消失。这些病理改变说明降血脂 药可有效的降低肝组织的血脂成分,但是单方银杏降血脂药对高血脂模 型动物肝脏的治疗效果存在不足,比较局限,银杏 + 阿托伐他汀复方降 血脂药物则可以有效地降低肝脏中的血脂成分,为今后降血脂药物的研 究奠定了基础。 长期的脂代谢紊乱可以导致过多的脂质在肾脏的异位蓄积,过多聚 积的细胞外基质可以导致系膜清除功能障碍,并挤压肾小球毛细血管管 腔,造成肾脏结构和功能的损害。对此高血脂模型动物服用不同组方的降 94 医药前沿 论 著 2013年1月 血脂药物治疗后,单方银杏组方并没有明显的降血脂作用,而观察复方降 血脂药物对高血脂动物模型肾组织的病理影响,见其血脂含量明显降低, 根据其病理切片可见肾小球部分肥大、硬化,间质有散在淋巴细胞浸润, 部分肾血管扩张,但其肾脏病理改变较模型组明显减轻。这些实验结果均 说明银杏 + 阿托伐他汀复方降血脂药物具有明显的降低血脂作用。 在动脉粥样硬化时 , 内皮细胞下的脂质沉着 , 用脂肪染色能将脂质 清晰地显示出来。通过对腹主动脉的油红 O 染色可见内膜较厚且平滑肌 细胞排列紊乱,大量泡沫细胞堆积,脂质斑块弥漫,脂质明显增厚,局 部隆起着色较深。而给予银杏 + 阿托伐他汀复方降血脂药物后腹主动脉 脂质明显变薄,无泡沫细胞堆积,可见复方药具有显著降低高血脂所致 的腹主动脉内膜脂质增厚的作用。 他汀类药物不良反应的发生率与其血药浓度密切相关。 药物的剂量、 药代动力学特性和药物相互作用等影响血药浓度的因素,都可能影响他 汀类药物不良反应的发生 [5]。阿托伐他汀与银杏黄酮发挥协同作用的机 制有待于进一步研究。本实验中银杏黄酮 + 阿托伐他汀复方组合的降血 脂药物,在减少阿托伐他汀药物剂量的前提下能够产生显著的降脂作用, 可避免单一药物长期使用的不良反应。从而达到增效、减毒的功效,从 而具有广阔的开发前景,是未来降脂药物研究的重要方向。具有巨大的 开发潜力与价值。 参考文献 [1] 杨专 , 青雷华 , 孙少平 . 普伐他汀联合非诺贝特治疗混合型高血脂症 [J]. 中国现代医生 , 2012,50(6):1-2. [2] 王德伟 , 朱红 , 银杏黄酮的药理作用和临床应用 [J]. 食品与药品 , 2006,8(6):7-9. [3] 苗军 , 张馨木 . 银杏叶提取物对实验性高脂血症血脂代谢的影响及抗 氧化作用 [J]. 中国老年学杂志 , 2006,(11):1544-1545. [4] 朱乃训 , 冯毅 , 张立 . 高脂饮食对大鼠血管内皮功能及腹主动脉形态 学的影响 [J]. 中国实用医药 , 2008,3(33):1-2. [5] 由春娜 , 芮伟 , 翟所迪 . 他汀类药物安全性及其在特定疾患者群中的 应用 [J]. 世界临床药物 , 2004,25(10):611-617. 基金项目:国家自然科学基金项目 (No.81260650) 胎儿先天性心脏病是指胎儿在母体发育的过程中,由于心脏及大血 管的形成障碍而引起的局部解剖结构异常,或者胎儿出生后应自动关闭 的通道未能闭合的心脏,被称为先天性心脏病。这种疾病不仅影响胎儿 的正常生长发育,而且会危及胎儿的生命健康。因此,在新时期加强对 彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查中的临床应用进行有效性研究,是当 前摆在人们面前的一项重大而又艰巨的任务。 1、资料与方法 1.1 资料 本组所研究的 60 例产检胎心异常患者是从医院收治的病例中选取 出来的,她们的年龄在 20-35 岁之间。这些患者的胎龄在 22 周到 40 周 之间,其中经产妇有 45 例,初产妇有 15 例。在进行胎儿先天性心脏病 筛查的过程中所使用的彩超设备是 ACCUVIX XQ 彩色 B 超仪器。 1.2 方法 利用 ACCUVIX XQ 彩色 B 超仪器对这 60 例患者进行检查的过程 中,选择患者的腹部作为重要的检测部位,检查探头的频率为 2-5 赫兹。 其检查的主要目的是研究胎儿先天性心脏病对胎儿的生长发育与身体健 康状况有多大的影响,是不是有不易治愈的状况,比如说大动脉转位、 法洛四联症、房室瓣闭锁等疾病。对于胎心异常的患者要到专业性的大 医院进行再次的彩超检查以确定诊断结果。在检查的过程中,如若没有 发现母体中胎儿有鲜明的先天性心脏病的特征,则可以定义为假阳性。 在进行检查的过程中,可以从多个切面对胎儿的心脏形态与各个结构之 间的关系进行有效性观察,在此过程中如若没有发现引产的患者,则可 以定义成筛查阴性,等到胎儿出生后发现胎儿有非常鲜明的先天性心脏 病的患者就可以定义成假阴性。 2、结果 利用统计学的相关理论知识对彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查 中的临床应用进行有效性研究发现,60 例胎心异常患者中所存在的问题 包括心内膜垫缺损的有 10 例,占据总数的 16.7%;单心室的有 15 例, 占据总数的 25%;心室发育不良的有 5 例,占据总数的 8.3% 三尖瓣闭 锁并大动脉转位的有 10 例,占据总数的 16.7%;单心房的有 5 例,占据 总数的8.3%;室缺的15例, 占据总数的25%。 经过彩色B超的筛查之后, 再经过对比性研究发现,其中有 3 例患者的诊断产生错误,这是因为孕 产妇的怀孕周期过长所造成的。 3、探讨 胎儿先天性心脏病是指胎儿在母体内生长发育的过程中,由于大 血管与心脏形成过程中出现不可阻障碍而引发局部解剖结构存在异常情 况,或者由于胎儿出生之后本身可以自动闭合的通道没有正常的闭合而 引发的一种先天性心脏病。这种疾病的出现需要及时地进行手术治疗, 反之就会影响胎儿正常的生长发育与生命健康。因此,在新时期加强对 彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查中的临床应用的研究,是当前人们热 衷研究的一大课题。 3.1 关于胎儿先天性心脏病的探讨 胎儿先天性心脏病最为影响人类生命健康的先天性遗传疾病,其 危害主要包括以下五个方面:一是胎儿先天性心脏病使得胎儿心内血流 动力学出现异常,不仅加重了胎儿心脏的运行负担,而且一旦胎儿的心 脏出现心力衰竭或者恶性的心律失常就会危及胎儿的生命安全;二是胎 儿先天性心脏病使得胎儿的机体出现身体组织或者器官的供血障碍等问 题,从而造成胎儿身体组织因缺氧而影响自身的身体发育;三是胎儿先 天性心脏病的病发,会对儿童的生理与心理健康造成很大的伤害;四是 胎儿先天性心脏病的病发,使得胎儿的肺部血流逐步增加,肺部感染的 几率逐步加大;五是胎儿先天性心脏病的病发,会对胎儿的心内膜结构 造成很大伤害。 引发胎儿先天性心脏病病发的因素包括:一是在胎儿方面,脑积水 或者腹壁裂、胎儿心率失常、染色体变异、羊水异常、胎儿在母体中的 发育迟缓等;二是在母体方面,母体患有慢性酒精中毒病、妊娠早期接 触农药、染发剂或者口服抗癌药物、孕妇的孕龄较大、家族遗传病、风 疹病毒感染等;三是其他方面的因素,产妇在怀孕三个月内,感染病毒, 比如说流行性腮腺炎、流感病毒、疱疹病毒以及柯萨奇病毒等,产妇近 亲结婚。 胎儿先天性心脏病在临床上的表现是:心脏发育不全、心脏功能不 齐全以及紫绀等。这种疾病属于小儿在成长发育期间较为常见的一种疾 病, 其在初生婴儿身上的发生率占据正常婴儿的0.81%, 如若治疗不及时, 患儿死亡的几率很高。因此,孕产妇要在怀孕期间定期到医院进行彩超 检查,一旦发现胎儿的心脏发育存在问题,要及时地寻求医生的救治, 并采取措施进行预防。 3.2 关于彩色 B 超对胎儿先天性心脏病筛查的探讨 根据权威机构的研究发现,当前诊断效果最好的是彩色 B 超。利 用彩色 B 超对孕产妇进行检查筛选,有助于帮助医生更好地了解胎儿心 内血流的动力学状况,降低了误诊与漏诊的概率,同时有效避免了普通 B 超在检查筛选的过程中出现假阳性与假阴性状况的出现;而且有助于 将胎儿大血管、心脏腔室、心脏内的各个精细结构进行清晰明了的展示, 同时这项技术可以清晰地将胎儿彩色血流图显示出来。但是彩色 B 超设 备的投资成本较高,需要患者支付的检查筛选费用较高,给患者与患者 家庭带来很大的经济压力。再加上进行彩色 B 超观察筛选的医生由于缺 少对心脏彩超相关理论知识的了解与掌握,缺少相关的实践经验,在进 行观察筛选的过程中难免会产生误差,出现误诊的现象。 由于胎儿的心脏在产妇怀孕 20 周之前很难在 B 超图像中清晰地显 示出来,或者由于 28 孕周之后的胎位已经相对稳定,当 B 超仪器的探 彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查中的临床应用 贺晓薇 1 肖曼2 (1 广东东莞塘厦医院 关东东莞 523710) (2 东莞塘厦人民医院 B 超室 关东东莞 523710) 【摘要】目的 采取措施对彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查中的临床应用进行有效性研究。方法 本组所研究的 60 例产检胎心异常患者是从医院收治的 病例中选取出来的,她们的年龄在 20-35 岁之间。对这些患者的临床检查资料进行有效性分析,在筛查的过程中采取彩色 B 超检查的方式对这些患者进行检查。 结果 利用统计学的相关理论知识对彩色 B 超在胎儿先天性心脏病筛查中的临床应用进行有效性研究发现,60 例胎心异常患者中所存在的问题包括心内膜垫缺 损的有 10 例,单心室的有 15 例,心室发育不良的有 5 例,三尖瓣闭锁并大动脉转位的有 10 例,单心房的有 5 例,室缺的 15 例。结论 在新时期利用彩色 B 超对胎儿先天性心脏病筛查中的应用进行有效性研究,不仅有助于帮助医生更好地了解并掌握胎儿在母体中心内血流的动力学状况与心脏的精细状况,而且有 助于提升 B 超检查的效率。但这一技术的技术尚未成熟,还需要进行进一步的研究。 【关键词】彩色 B 超 胎儿先天性心脏病 筛查 临床分析研究 【中图分类号】R445.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)01-0094-02
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