逆转录病毒载体介导的hbsag抗原表达及其稳定性研究.pdf

收藏

编号:20190125230615670106    类型:共享资源    大小:104.28KB    格式:PDF    上传时间:2019-02-16
  
5
金币
关 键 词:
HBSAg及 表达逆转录病毒载体的 HBSAg 逆转录病毒载体 HBsAg 表达载体
资源描述:
基金项目: 国家自然科学基金青年基金项目 (!“#““#$%) ; 第 :391. 法检测 +,-./ 表达; 以感染后 8*#% 抗性克隆形成数确定假病毒颗粒的活力。结果在 各个时间段 +,-./ 表达量均差异无显著性。在 ? 391. EKL7I CDK7NLCFD +728)#/9L RE- BEIS LF KCDS NBED/7- CD +,-./ EPFJDL EL SCKK7I7DL CDL7IMEH- EDS SCKK7I7DL L7P27IELJI7-A 8*#% I7-C-LEDL NHFD7-,BFR7M7I,R7I7 MEICEQH7A VB7D KIFT7D EL ? 7LIFMCICSE7; =7HH HCD7 为探讨逆转录病毒载体表达乙型肝炎 +,-./ 基因的稳定性, 构建了表达 +,-./ 的逆转录病毒载 体 23415X, 加 #“Y,1. 及双抗。 #A!+,-./ 重组逆转录病毒载体的构建+,-./ 重组逆转录病毒载体的构建如图 #, 用 NF;9Z,EP+9 从 6,[1\G2 =HCD 0CIFH, 172L7PQ7I 5? 细胞及抗性筛选电转 前 @7 A 细胞换培养基, 电转时收集细胞并计数。电 转缓冲液用无牛血清的BCDC, 电转条件: 电压 @EE F、 电容 GHE!I, 电转前后冰浴 5E J-(, 电转后 7K A 以 5EL5 传代, 并加选择培养基 (含 M75K 7EE J%N 9) ,@ 周后挑取抗性克隆于 @7 孔板中, 长满后取上 清用 D9O;$ 方法检测 !“#$% 表达, 筛选高表达克 隆、 扩增, 收集假病毒颗粒冻存于 P @EQ、P 7EQ 和 P ?EQ备用。 56H假病毒颗粒滴度测定第 5 天, 将 H R 5EH S 细胞接种于 TE JJ 培养皿中; 第 @ 天, 倾去 培养基, 每瓶皿加入新鲜培养基 5 J4 及病毒液 5E!4 或 HE!4, 并加 8’4UV*/(/ (聚凝胺) 至终浓度 K J%N9, 混 匀后置 基因片段 如图 所示。 图 ’ 逆转录 8 基因在真核细胞中表达 “#$%’; %/(/ /01*/##-’( -( /+]3*U’)-, ,/44# [/)/,)/[ VU \S=8/1)/JV/* @EE@, F’4 5T, 万方数据 达克隆 ! 次测定病毒滴度分别为 “#$ % 的变化假病毒颗粒在不同的 温度、 不同的时间保存后, 感染真核细胞 01234、 560!7!、 4-!, 感染后生长融合的细胞传代培养 $. 的上清中 089:; 表达量 〔吸光度 (! 值, 检测 波长 $-’ @ G1HH GHA19 FB@1E E1GAF@ J=E?9 =B1G@=A F@ JFE=A?9 @=@ (K) FL @1@O, M 4’N) ’P! 的表达量 “#$% ! JFH?1 FB@1E E1GAF@ J=E?9 =B1G@=A F@ JFE=A?9 @=@ (K) 细胞 (1HH9 时间 (月, M 4’N) 7=@O, M 4’N) ’P! 与 ’ 个月比较 “ R ’#’“ 5A@1: @O1 JFH?19 9@FL BAE AB ! L1H1EF@=A9#!“ R ’#’“ 089:; JFH?19 F@ L=BB1E1@ @=@ GA@O ’讨论 逆转录病毒载体在基因治疗中使用最广泛, 目 前进行的几百项基因治疗试验中 $“V用的是逆转 录病毒载体 〔4〕。为研究逆转录病毒载体保存和表达 抗原的稳定性, 我们构建了表达 089:; 的逆转录病 毒载体, 分别保存在 M 4’N、 M $’N、 M /’N, 在不同 的时间感染 01234、 560!7!、 4-! 细胞, 以 3$ 的 表达量。结果显示在各个时间点的细胞克隆所表达 089:; 的量与 ’ 个月比较差异无显著性, 而各个时 间点的细胞克隆数则变化较大。 M 4’N条件保存时 ! 种细胞的克隆数 P 个月后即明显下降, 4$ 个月后 无克隆形成, 说明假病毒颗粒已无感染能力; M $’N 保存时 P 个月后克隆形成数差异无显著性, 11 @O1EF2\# X1 ,=J1E ]=9, 119# 311 7O1E, 1E K, XGO=HU :, aG^1E@ 03, 1@ FH#8=G=9@EA=G E1@EAJ=EFH J1G@AE9 BAE GA=; T=@O G1HHD9?EBFG1 ;# 311 7O1E, &---, P: &444D&4!’# (收稿日期: 4’’4D’!D&!) ·.!4·中华实验和临床病毒学杂志 4’’4 年 - 月第 &P 卷第 ! 期(O=191 b a‘2 (H= Z=EAH, X12@1I1E 4’’4, ZAH &P, 5A#! 万方数据
展开阅读全文
  皮皮文库所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
0条评论

还可以输入200字符

暂无评论,赶快抢占沙发吧。

关于本文
本文标题:逆转录病毒载体介导的hbsag抗原表达及其稳定性研究.pdf
链接地址:http://www.ppdoc.com/p-10940017.html
关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

copyright@ 2008-2018 皮皮文库网站版权所有
经营许可证编号:京ICP备12026657号-3 

收起
展开