重组人干细胞因子理化性质和生物活性分析.pdf

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编号:20181206023526670111    类型:共享资源    大小:109.00KB    格式:PDF    上传时间:2019-02-16
  
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干细胞活性因子 生物学 干细胞 活性因子 与生物 特性与活性 因子和细胞因子 生物活性 化学性质 生物因子 干细胞活性 性质和
资源描述:
重 组 人 干 细 胞 因 子 理 化 性 质 和 生 物 活 性 分 析 吴 军 , 巩 新 , 唱 韶 红 , 赵 志 虎 , 马 清 钧 ( 军 事 医 学 科 学 院 生 物 工 程 研 究 所 , 北 京 1?0?0?0?7?1?) [ 收 稿 日 期 ] 2?0?0?0? -? 0?4? -? 2?1? [ 作 者 简 介 ] 吴 军 ( 1?9?6?9? -? ) , 男 , 浙 江 富 阳 人 , 博 士 , 助 理 研 究 员 。 [ 摘 要 ] 干 细 胞 因 子 ( S?t?e?m? c?e?I?I? f?a?c?t?O?r?, S?C?F?) 是 一 种 对 造 血 细 胞 有 重 要 作 用 的 因 子 , 在 自 体 外 周 血 造 血 前 体 细 胞 移 植 、 肿 瘤 放 化 疗 的 辅 助 治 疗 、 贫 血 和 其 他 血 液 病 的 治 疗 方 面 有 良 好 的 应 用 前 景 。 目 的 : 分 析 本 所 制 备 的 r?h?S?C?F? 的 理 化 性 质 和 生 物 活 性 。 方 法 : 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 、 质 谱 、 凝 胶 高 效 液 相 色 谱 等 方 法 分 别 测 定 了 制 品 的 纯 度 、 分 子 量 、 氨 基 酸 组 成 、 紫 外 光 谱 等 , 并 用 T?F?-?1? 细 胞 测 定 了 制 品 的 生 物 活 性 。 结 论 : 制 品 分 子 量 为 1?8? 5?5?8?, 与 天 然 h?S?C?F? 的 差 异 小 于 0?.?2?%?, 产 物 以 非 共 价 二 聚 体 形 式 存 在 。 氨 基 酸 组 成 与 天 然 h?S?C?F? 相 同 , 紫 外 光 谱 为 典 型 的 蛋 白 光 谱 , 在 2?7?7? n?m? 有 特 征 吸 收 , 比 活 为 0?.?9?5? ? 1?0?6?U?/?m?g?, 与 国 外 参 考 品 相 似 。 上 述 结 果 初 步 说 明 制 备 的 r?h?S?C?F? 理 化 性 质 与 天 然 h?S?C?F? 一 致 , 生 物 活 性 良 好 , 有 望 进 一 步 开 发 用 于 临 床 。 [ 关 键 词 ] 干 细 胞 因 子 ; 生 物 活 性 ; 理 化 性 质 ; 色 谱 法 , 高 压 液 相 ; 碎 片 质 谱 法 [ 中 图 分 类 号 ] O?5?1?6?[ 文 献 标 识 码 ] A? [ 文 章 编 号 ] 1?0?0?0?-?5?5?0?1? ( 2?0?0?0?) 0?3?-?0?2?0?0?-?0?4? P?h?y?s?i?c?o?-?c?h?e?m?i?c?a?l? p?r?o?p?e?r?t?y? a?n?d? b?i?o?a?c?t?i?v?i?t?y? d?e?t?e?r?m?i?n?a?t?i?o?n? o?f? r?e?c?o?m?b?i?n?a?n?t? s?t?e?m? c?e?l?l? f?a?c?t?o?r? W?U? ?U?I?, G?0?N?G? X?i?I?g?, C?H?A?N?G? S?h? ?O?-?h?O?I?g?, Z?H?A?0? Z?h?i?-?h?U?, M?A? 0?i?I?g?-? ?U?I? ( I?n?S?t?i?t?u?t?e? O?f? B?i?O?t?e?c?h?n?O?I?O?g?y?, A?c?a?d?e?m?y? O?f? M?i?I?i?t?a?r?y? M?e?d?i?c?a?I? S?c?i?e?n?c?e?S?, B?e?i?j?i?n?g? 1?0?0?0?7?1?, C?h?i?n?a?) [ A?b?s?t?r?a?c?t?] S?t?e?m? c?e?I?I? f?a?c?t?O?r? ( S?C?F?) i?S? a?n? i?m?p?O?r?t?a?n?t? h?e?m?a?t?O?p?O?i?e?t?i?c? g?r?O?w?t?h? f?a?c?t?O?r?, i?t? m?a?y? b?e? u?S?e?f?u?I? i?n? m?O?b?i?I?i?z?a?-? t?i?O?n? O?f? a?u?t?O?I?O?g?O?u?S? p?e?r?i?p?h?e?r?a?I? b?I?O?O?d? p?r?O?g?e?n?i?t?O?r? c?e?I?I?S? f?O?r? t?r?a?n?S?p?I?a?n?t?a?t?i?O?n?, S?u?p?p?I?e?m?e?n?t?a?r?y? t?h?e?r?a?p?y? O?f? t?u?m?O?r?, t?h?e?r?a?p?y? O?f? a?n?e?m?i?a? a?n?d? O?t?h?e?r? h?e?m?a?t?O?p?O?i?e?t?i?c? d?i?S?e?a?S?e?S?.? O?b?j?e?c?t?i?v?e?: T?O? d?e?t?e?r?m?i?n?e? t?h?e? p?h?y?S?i?c?O?-?c?h?e?m?i?c?a?I? p?r?O?p?e?r?t?y? a?n?d? b?i?O?a?c?-? t?i?V?i?t?y? O?f? r?e?c?O?m?b?i?n?a?n?t? S?t?e?m? c?e?I?I? f?a?c?t?O?r? p?r?O?d?u?c?e?d? b?y? O?u?r? i?n?S?t?i?t?u?t?e?.? M?e?t?h?o?d?s?: T?h?e? p?u?r?i?t?y?, m?O?I?e?c?u?I?a?r? w?e?i?g?h?t?, a?m?i?n?O? a?c?i?d? c?O?m?p?O?S?i?t?i?O?n? a?n?d? U?V? S?p?e?c?t?r?a? O?f? p?r?O?d?u?c?t? w?e?r?e? d?e?t?e?r?m?i?n?e?d? b?y? R?P?-?H?P?L?C?, M?S?, g?e?I? f?i?I?t?r?a?t?i?O?n?-?H?P?L?C? e?t?c?.? T?h?e? b?i?O?a?c?t?i?V?i?t?y? O?f? p?r?O?d?u?c?t? w?a?S? d?e?t?e?r?m?i?n?e?d? b?y? T?F?-?1? c?e?I?I?.?C?o?n?c?l?u?s?i?o?n?s?: T?h?e? p?u?r?i?t?y? O?f? p?r?O?d?u?c?t? w?a?S? g?r?e?a?t?e?r? t?h?a?n? 9?8?%? a?n?d? t?h?e? m?O?I?e?c?u?I?a?r? w?e?i?g?h?t? d?e?t?e?r?m?i?n?e?d? w?a?S? 1?8? 5?5?8? w?h?i?c?h? w?a?S? d?i?f?f?e?r?e?n?t? f?r?O?m? n?a?t?u?r?a?I? h?S?C?F? b?y? I?e?S?S? t?h?a?n? 0?.?2?%? .? T?h?e? p?r?O?d?u?c?t? w?a?S? a?n? u?n?c?O?V?a?I?e?n?t? d?i?m?e?r?.?T?h?e? r?e?S?u?I?t?S? O?f? a?m?i?n?O? a?c?i?d? c?O?m?p?O?S?i?t?i?O?n? a?n?d? N?-?t?e?r?m?i?n?a?I? a?m?i?n?O? a?c?i?d? S?e?g?u?e?n?c?e? a?n?a?I?y?S?i?S? w?e?r?e? S?i?m?i?I?a?r? t?O? t?h?O?S?e? O?f? n?a?t?u?r?a?I? h?S?C?F? e?X?c?e?p?t? h?a?V?i?n?g? a?n? a?d?d?i?t?i?O?n?a?I? m?e?t?h?i?O?n?i?n?e?.?T?h?e? U?V? S?p?e?c?-? t?r?u?m? w?a?S? a?n? t?y?p?i?c?a?I? p?r?O?t?e?i?n? O?n?e? w?i?t?h? S?p?e?c?i?a?I? a?b?S?O?r?p?t?i?O?n? a?t? 2?7?7? n?m?.?T?h?e? S?p?e?c?i?f?i?c? a?c?t?i?V?i?t?y? O?f? r?h?S?C?F? w?a?S? 0?.?9?5? ? 1?0?6?U?/?m?g?, w?h?i?c?h? w?a?S? S?i?m?i?I?a?r? t?O? t?h?e? S?t?a?n?d?a?r?d? O?f? N?I?B?S?C?.? A?I?I? t?h?e?S?e? r?e?S?u?I?t?S? S?h?O?w?e?d? t?h?e? p?h?y?S?i?c?O?-?c?h?e?m?i?c?a?I? p?r?O?p?e?r?t?y? O?f? p?r?O?d?u?c?t? w?a?S? S?i?m?i?I?a?r? t?O? t?h?e? n?a?t?u?r?a?I? O?n?e?.?I?t? h?a?S? h?i?g?h? b?i?O?I?O?g?i?c?a?I? a?c?t?i?V?i?t?y?, a?n?d? m?a?y? b?e? u?S?e?f?u?I? i?n? h?e?m?a?t?O?p?a?t?h?y?.? [ K?e?y? w?o?r?d?s?] S?t?e?m? c?e?I?I? f?a?c?t?O?r?; b?i?O?I?O?g?i?c?a?I? a?c?t?i?V?i?t?y?; p?h?y?S?i?c?O?-?c?h?e?m?i?c?a?I? p?r?O?p?e?r?t?y?; c?h?r?O?m?a?t?O?g?r?a?p?h?y?, h?i?g?h? p?r?e?S?S?u?r?e? I?i?g?u?i?d?; m?a?S?S? f?r?a?g?m?e?n?t?O?g?r?a?p?h?y? 干 细 胞 因 子 ( S?t?e?m? c?e?I?I? f?a?c?t?O?r?, S?C?F?) 是 一 种 对 造 血 细 胞 有 重 要 作 用 的 因 子 , 它 主 要 作 用 于 早 期 多 能 干 细 胞 、 祖 细 胞 , 同 时 对 晚 期 成 熟 血 细 胞 也 有 作 用 。 动 物 实 验 和 临 床 试 验 结 果 显 示 其 在 自 体 外 周 血 造 血 前 体 细 胞 移 植 、 肿 瘤 放 化 疗 的 辅 助 治 疗 、 贫 血 和 其 他 血 液 病 的 治 疗 方 面 有 良 好 的 应 用 前 景 [ 1? ~? 3?] 。 为 了 满 足 基 础 研 究 和 临 床 应 用 的 需 要 , 我 所 已 完 成 了 对 人 S?C?F? 基 因 的 克 隆 和 高 表 达 , 并 初 步 建 立 了 该 工 程 菌 0?0?2? 军 事 医 学 科 学 院 院 刊 2?0?0?0? 年 9? 月 第 2?4? 卷 第 3? 期 B?u?I?I? A?c?a?d? M?i?I? M?e?d? S?c?i?, S?e?p?2?0?0?0?; V?O?I? 2?4?N?O? 3? 的 发 酵 、 产 物 纯 化 和 复 性 的 中 试 工 艺 。 我 们 对 制 备 的 r?h?S?C?F? 的 理 化 性 质 和 生 物 活 性 进 行 初 步 分 析 。 1?材 料 与 方 法 1?.?1?纯 度 分 析 ~?P?l?0?5?0? 高 效 液 相 色 谱 仪 为 惠 普 公 司 产 品 , C?8? 4?.?0? m?m?X? 2?5?0? m?m? 色 谱 柱 ( 中 国 科 学 院 大 连 化 学 物 理 所 ) ; U?V? 检 测 器 , 波 长 2?8?0? n?m?; 流 动 相 A?: 0?.?l?%?T?F?A? +? 超 纯 水 , 流 动 相 B?: 0?.?l?%?T?F?A? +? 乙 腈 。 洗 脱 程 序 为 : 0? !?5?0? m?i?n?, A?: l?0?0?%?!?l?0?%?, B?: 0?%?!?9?0?%?。 上 样 量 2?0? !?I?。 1?.?2?分 子 量 测 定 1?.?2?.?1?S?D?S?-?P?A?G?E? 法 l?5?%?分 离 胶 , 4?.?5?%?浓 缩 胶 , 蛋 白 分 子 量 标 准 购 自 上 海 丽 珠 生 物 技 术 有 限 公 司 。 1?.?2?.?2?基 质 辅 助 激 光 解 吸 附 飞 行 时 间 质 谱 法 T?O?f?-? s?p?e?c?质 谱 仪 , 氮 气 激 光 源 , 线 性 飞 行 距 离 : 6?5? c?m?, 加 速 电 压 2?3? 6?0?8? V?, 检 测 器 电 压 -? l? 7?5?0? V?, 扫 描 频 率 4? n?s?, 信 号 为 5?0? 次 扫 描 的 累 加 结 果 。 1?.?2?.?3?凝 胶 排 阻 色 谱 法 P?E? L?C?-?2?3?5? 高 效 液 相 色 谱 仪 , T?S?K?2?0?0?0? 色 谱 柱 。 S?i?g?m?a? 公 司 产 蛋 白 分 子 量 标 准 。 将 标 准 蛋 白 分 别 进 样 , 测 其 保 留 时 间 , 以 标 准 蛋 白 分 子 量 的 对 数 与 保 留 时 间 作 线 性 回 归 ; r?h?S?C?F? 制 品 同 样 条 件 下 进 样 , 测 定 其 保 留 时 间 代 入 上 述 线 性 方 程 计 算 r?h?S?C?F? 的 表 观 分 子 量 。 1?.?3?氨 基 酸 组 成 分 析 采 用 D?A?B?S? 柱 前 衍 生 法 , 样 品 水 解 和 衍 生 按 B?e?c?k?m?a?n? 公 司 试 剂 盒 提 供 的 方 法 完 成 , 色 谱 仪 : B?e?c?k?-? m?a?n? 黄 金 系 统 “?型 , u?I?t?r?a?s?p?h?e?r?e? C?l?8? 4?.? 6? m?m? X? 2?5?0? m?m?, 4?3?6? n?m? 检 测 , 混 合 氨 基 酸 标 准 品 ( B?e?c?k?m?a?n? 公 司 产 品 ) 。 流 动 相 A?: l?l? m?m?O?I?/?L? 柠 檬 酸 ( 含 4?%?二 甲 基 甲 酰 胺 ) , 用 N?a?O?~? 调 p?~? 至 6?.?4?, B?: 3?0?%?A? 液 , 7?0?%?乙 腈 ( 含 4?%?二 甲 基 甲 酰 胺 ) , 流 速 l?.?4? m?I?/?m?i?n?。 洗 脱 程 序 见 表 l?。 表 1? 洗 脱 程 序 !? /?m?i?n?流 动 相 A? ( %?) 流 动 相 B? ( %?) 0?4?4?5?6? l?7?.?2?l?4?8?6? 2?3?.?2?0?l?0?0? 2?9?.?2?7?5?2?5? 3?9?.?9?7?5?2?5? 1?.?4?紫 外 光 谱 B?e?c?k?m?a?n? D?U?6?4?0? 型 紫 外 分 光 光 度 计 , 波 长 扫 描 范 围 2?2?0? ~? 3?2?0? n?m?, 样 品 为 0?.?2? m?g?/?m?I?。 1?.?5?活 性 测 定 T?F?-?l? 细 胞 株 由 中 国 预 防 医 学 科 学 院 病 毒 所 吴 淑 华 教 授 惠 赠 。 r?h?S?C?F? 活 性 参 考 品 由 英 国 国 立 生 物 标 准 与 控 制 研 究 所 ( N?a?t?i?O?n?a?I? I?n?s?t?i?t?u?t?e? f?O?r? B?i?O?I?O?g?i?c?a?I? S?t?a?n?d?a?r?d?s? a?n?d? C?O?n?t?r?O?I?, N?I?B?S?C?) 惠 赠 ( I?n?v?O?i?c?e? n?u?m?b?e?r? l?6?7?l?6?) 。 无 血 清 培 养 基 由 本 所 细 胞 工 程 实 验 室 陈 昭 烈 副 教 授 惠 赠 。 r?h?S?C?F? 样 品 用 无 血 清 培 养 基 在 9?6? 孔 板 上 作 倍 比 稀 释 , 每 孔 加 样 l?0?0?!?I?, T?F?-?l? 细 胞 培 养 在 含 l?0?%?新 生 牛 血 清 和 2?n?g?/?m?I? G?M?-?C?S?F? 的 l?6?4?0? 培 养 基 中 , 使 用 前 , 先 用 无 血 清 培 养 基 洗 细 胞 4? 次 , 用 无 血 清 培 养 基 稀 释 至 浓 度 为 4? X? l?0?5?/?m?I?, 以 每 孔 l?0?0? !?I? 细 胞 加 入 上 述 9?6? 孔 板 , 于 3?7?C?、 5?%?C?O?2?条 件 下 培 养 6?5? h? 左 右 , 每 孔 加 2?0?!?I? M?T?T?, 再 培 养 5? h? 后 , 加 入 2?0?%?S?D?S? 8?0?!?I?, 溶 解 后 在 酶 联 仪 上 测 “?5?7?0?。 r?h?S?C?F? 活 性 参 考 品 用 同 样 条 件 测 定 , 作 为 活 性 计 算 的 标 准 。 2?结 果 与 讨 论 2?.?1?纯 度 分 析 采 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 测 得 制 品 的 纯 度 ( 图 l?) 大 于 9?8?%?, 可 用 于 进 一 步 的 理 化 性 质 和 生 物 活 性 测 定 。 图 1? r?h?S?C?F? 的 反 相 高 效 液 相 色 谱 分 析 2?.?2?分 子 量 测 定 分 子 量 是 表 征 一 个 蛋 白 特 性 的 主 要 参 数 之 一 , 传 统 测 定 方 法 是 采 用 S?D?S?-?P?A?G?E? 法 , 我 们 采 用 该 法 , 依 据 电 泳 距 离 测 得 r?h?S?C?F? 的 分 子 量 大 约 为 l?9? 0?0?0?, 与 理 论 分 子 量 l?8? 5?8?9? 误 差 小 于 l?0?%?。 S?D?S?-?P?A?G?E? 测 定 分 子 量 的 缺 点 是 误 差 较 大 , 难 以 区 分 蛋 白 分 子 的 微 小 改 变 , 如 一 个 或 几 个 氨 基 酸 的 缺 失 等 , 而 飞 行 时 间 质 谱 分 析 可 以 测 定 蛋 白 分 子 的 精 确 分 子 量 , 其 误 差 可 小 于 0?.?2?%?, 对 于 h?S?C?F? 这 样 分 子 量 较 小 的 蛋 白 , 即 使 缺 失 一 个 氨 基 酸 也 能 被 检 测 到 。 我 们 用 飞 行 时 间 质 谱 分 析 , 测 得 r?h?S?C?F? 的 精 确 分 子 量 为 l?8? 5?5?8?( 图 2?) , 与 根 据 天 然 h?S?C?F? 氨 基 酸 序 列 计 算 的 理 论 分 子 量 l?0?2? 第 3? 期 吴 军 , 等 .? 重 组 人 干 细 胞 因 子 理 化 性 质 和 生 物 活 性 分 析 1?8? 5?8?9? 仅 差 0?.?1?7? ?, 在 仪 器 误 差 0?.?2? ?以 内 , 可 以 认 为 r?1?S?C?F? 的 分 子 量 是 正 确 的 。 图 2? 基 质 辅 助 激 光 解 吸 附 飞 行 时 间 质 谱 法 测 定 r?h?S?C?F? 的 分 子 量 M?+? 为 分 子 离 子 峰 ; M?2? +? 和 M?3? +? 分 别 为 二 价 和 三 价 离 子 峰 由 凝 胶 排 阻 色 谱 测 得 的 r?1?S?C?F? 的 保 留 时 间 为 7?.? 5? m?i?D?, 而 作 为 分 子 量 标 准 的 牛 血 清 白 蛋 白 ( 分 子 量 6?6? 0?0?0?) 和 溶 菌 酶 ( 分 子 量 为 1?4? 4?0?0?) 分 别 为 6?.?1? m?i?D? 和 8?.?6? m?i?D?。 因 而 r?1?S?C?F? 的 表 观 分 子 量 为 3?5? 0?0?0? ( 图 3?) , 约 为 飞 行 时 间 质 谱 法 测 定 分 子 量 的 两 倍 。 由 于 凝 胶 排 阻 色 谱 是 在 接 近 生 理 条 件 下 进 行 的 , 测 定 时 非 共 价 聚 体 不 会 解 聚 , 而 飞 行 时 间 质 谱 法 测 定 时 由 于 电 离 的 作 用 , 非 共 价 聚 体 会 解 聚 , 但 共 价 聚 体 不 易 解 聚 。 可 见 我 们 制 备 的 r?1?S?C?F? 是 以 非 共 价 二 聚 体 形 式 存 在 的 , 这 一 结 果 与 文 献 [ 2?, 3?] 报 道 人 干 细 胞 因 子 的 活 性 形 式 是 非 共 价 的 二 聚 体 是 一 致 的 。 2?.?3?氨 基 酸 组 成 分 析 样 品 酸 水 解 后 , 用 高 效 液 相 色 谱 ( H?P?L?C?) 分 离 , 以 标 准 氨 基 酸 作 外 标 定 量 分 析 , 测 得 各 种 氨 基 酸 成 分 如 表 2? 所 示 , 其 中 T?r?p? 和 C?y?S? 水 解 易 破 坏 , 测 定 值 偏 低 , G?1?y? 和 H?i?S? 含 量 低 , 误 差 较 大 , 其 他 氨 基 酸 组 成 均 与 理 论 值 相 近 。 图 3? 凝 胶 H?P?L?C? 法 测 定 r?h?S?C?F? 的 分 子 量 表 2? r?h?S?C?F? 氨 基 酸 组 成 分 析 峰 号 氨 基 酸 r?1?S?C?F? 测 定 值 ( ?) 天 然 1?S?C?F? 预 测 值 ( ?) 1?A?S?p? +? A?S?D?1?6?.?8?8?.?5? +? 5?.?5? 2?G?1?u? +? G?1?D?8?.?6?6?.?1? +? 0?.?6? 3?S?e?r?1?2?.?2?1?2?.?4? 4?T?1?r?5?.?7?4?.?8? 5?A?r?g?4?.?2?3?.?6? 6?G?1?y?2?.?6?1?.?8? 7?A?1?a?2?.?9?2?.?4? 8?P?r?O?5?.?2?6?.?1? 9?V?a?1?1?0?.?0?1?1?.?5? 1?0?M?e?t?3?.?0?3?.?0? 1?1?I?1?e?4?.?7?5?.?5? 1?2?L?e?u?8?.?9?9?.?1? 1?3?P?1?e?5?.?4?5?.?5? 1?4?C?y?S?0?.?3?2?.?4? 1?5?L?y?S?7?.?3?8?.?5? 1?6?T?r?p?-?0?.?6? 2?.?4?紫 外 光 谱 样 品 的 紫 外 光 谱 ( 图 4?) 表 现 为 典 型 的 蛋 白 光 谱 , 在 2?7?7? D?m? 处 有 一 蛋 白 的 特 征 吸 收 峰 。 图 4? r?h?S?C?F? 的 紫 外 光 谱 2?0?2? 军 事 医 学 科 学 院 院 刊 2?0?0?0? 年 9? 月 第 2?4? 卷 第 3? 期 2?.?5?生 物 活 性 测 定 纯 化 产 品 与 N?I?B?S?C? 惠 赠 的 r?1?S?C?F? 活 性 标 准 品 相 似 , 在 无 血 清 培 养 基 中 , 对 T?F?-?l? 细 胞 的 生 长 有 明 显 的 刺 激 作 用 , 其 半 数 有 效 剂 量 为 6? ~? 7? D?g?/?m?1? ( 图 5?) , 与 N?I?B?S?C? 参 考 品 相 似 , 比 活 为 0?.?9?5? X? l?0?6?I?U?/?m?g?。 图 5? r?h?S?C?F? 对 T?F?-?1? 细 胞 的 作 用 制 备 的 r?1?S?C?F? 还 可 明 显 增 加 人 骨 髓 粒 细 胞 、 巨 噬 细 胞 系 集 落 ( C?F?U?-?G?M?) 的 产 率 , r?1?S?C?F? 剂 量 从 0? 增 加 到 4?0?.? 0? D?g? 时 , C?F?U?-?G?M? 从 ( l? 1? 0?.? 4?) /?2? X? l?0?5? 增 加 到 ( 3?4?8? .? 0? 1? l?l? .? 6?) /? 2? X? l?0?5?骨 髓 单 核 细 胞 。 r?1?S?C?F? 与 G?-?C?S?F?, 或 与 E?P?0? +? I?L?-?3? 伍 用 都 呈 现 明 显 的 协 同 作 用 , 且 协 同 作 用 也 随 剂 量 的 增 加 而 增 大 。 华 东 理 工 大 学 生 物 反 应 器 国 家 重 点 实 验 室 的 张 孝 兵 、 谭 文 松 使 用 我 们 制 备 的 r?1?S?C?F? ( 单 用 或 与 I?L?-?3? 合 用 ) 进 行 脐 血 造 血 前 体 细 胞 的 扩 增 培 养 也 取 得 了 明 显 效 果 , C?F?U?-?G?M? 和 总 细 胞 数 都 有 较 大 幅 度 的 提 高 。 上 述 结 果 初 步 说 明 制 备 的 r?1?S?C?F? 理 化 性 质 与 天 然 1?S?C?F? 基 本 一 致 , 生 物 活 性 良 好 , 有 望 进 一 步 开 发 用 于 临 床 。 [ 参 考 文 献 ] [ l?] W?i?1?1?i?a?m?S? D?E? , E?i?S?e?D?m?a?D? J?, B?a?i?r?c? A?, e?t? a?l?.? I?c?e?D?t?i?f?i?c?a?t?i?O?D? O?f? a? 1?i?g?a?D?c? f?O?r? t?1?e? c?-?k?i?t? p?r?O?t?O?-?O?D?c?O?g?e?D?e? [ J?] .? C?e?1?1?, l?9?9?0?, 6?3? ( 2?) : l?6?7?.? [ 2?] 0?r?a?Z?i? A?, G?O?r?c?O?D? M?S?, J?O?1?D? K?, e?t? a?l?.? I?n? 1?i?1?o? e?f?f?e?c?t? O?f? r?e?c?O?m?D?i?-? D?a?D?t? 1?u?m?a?D? S?t?e?m? c?e?1?1? f?a?c?t?O?r? t?r?e?a?t?m?e?D?t?: a? m?O?r?p?1?O?1?O?g?i?c? a?D?c? i?m?-? m?u?D?O?1?i?S?t?O?c?1?e?m?i?c?a?1? S?t?u?c?y? O?f? D?O?D?e? m?a?r?r?O?w? D?i?O?p?S?i?e?S? [ J?] .? A?m? J? C?1?i?D? P?a?t?1?O?1?, l?9?9?5?, l?0?3? ( 2?) : l?7?7?.? [ 3?] S?1?p?a?1?1? E?J?, W?1?e?e?1?e?r? C?A?, T?u?r?D?e?r? S?A?, e?t? a?l?.?A? r?a?D?c?O?m?i?Z?e?c? p?1?a?S?e? 3? S?t?u?c?y? O?f? p?e?r?i?p?1?e?r?a?1? D?1?O?O?c? p?r?O?g?e?D?i?t?O?r? c?e?1?1? m?O?D?i?1?i?Z?a?t?i?O?D? w?i?t?1? S?t?e?m? c?e?1?1? f?a?c?t?O?r? a?D?c? f?i?1?g?r?a?S?t?i?m? i?D? 1?i?g?1?-?r?i?S?k? D?r?e?a?S?t? c?a?D?c?e?r? p?a?-? t?i?e?D?t?S? [ J?] .? B?1?O?O?c?, l?9?9?9?, 9?3? ( 8?) : 2?4?9?l?.? ( 本 文 编 辑 姜 晓 舜 ) 3?0?2? 第 3? 期 吴 军 , 等 .? 重 组 人 干 细 胞 因 子 理 化 性 质 和 生 物 活 性 分 析
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